ヒト免疫グロブリン・ラムダ遺伝子座の全構造解析:人工抗体作製を目指して

人免疫球蛋白 lambda 基因座的完整结构分析：旨在生产人工抗体

• 批准号: 07770245
• 负责人: 川崎 和彦
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770245/
• 关键词: 免疫グログリン; ラムダ遺伝子; マッピング; 制限酵素地図; ヒトゲノム; 脱髄性末梢神経炎; 塩基配列; 偽遺伝子

ヒト抗体V遺伝子のうち、λ遺伝子(V_λ)はH鎖遺伝子、κ遺伝子に比べて解析が遅れている。ヒトV_λ遺伝子座の大きさ及び遺伝子の分布や総数については従来全く未知であった。本研究の目的は、まずV_λ遺伝子座全体をクローン化することにより、全V_λ遺伝子の分布および総数を明らかにすることである。つぎにクローン化した遺伝子領域の塩基配列を明らかにすることにより、全V_λ遺伝子断片の配列を解明し、全ヒト抗体遺伝子をカタログ化する。全ヒト抗体遺伝子のカタログ化は、あらゆる抗体を遺伝子工学的に産生するための重要な課題である。本研究期間中に、全V_λ遺伝子座のクローン化に成功した。また、クローン化した全ての領域に関してEco RIおよびHin dIIIを用いて制限酵素地図を作成した。4個の代表的なV_λ遺伝子プローブを用いてサザンハイブリダイゼーション解析を行ったところ、V_λ遺伝子座は866kbの大きさであり、この領域にはV_λプローブとハイブリダイズするEco RI-Hin dIII断片が69個存在することが判明した。V_λ遺伝子に関してさらに詳細に解析を進める目的で、これら69個のEco RI-Hin dIII断片をプラスミドベクターにサブクローン化した。このうち最も上流に位置する9個の断片、合計30kbの塩基配列を段階的欠損導入法を用いて決定したところ、この領域に2個のV_λ遺伝子断片および7個のV_λ偽遺伝子断片を発見した。これらのV_λ遺伝子断片のうちの1個は脱髄性末梢神経炎患者から分離された自己抗体遺伝子であった。現在、他の全てのV_λ遺伝子の塩基配列を決定すべくゲノムDNAシーケンシングを行っている。

ヒ ト antibody V heritage 伝 son の う ち, lambda but 伝 (V_ lambda) は H lock heritage 伝 son, kappa but 伝 predominate に than べ て parsing が 遅 れ て い る. ヒ ト V_ lambda heritage 伝 stroma の big き さ and び survived 伝 son の distribution や 総 number に つ い て は 従 to full く unknown で あ っ た. は の purpose, this study ま ず V_ lambda heritage 伝 stroma all を ク ロ ー ン change す る こ と に よ り, whole V_ lambda heritage 伝 son の distribution お よ び 総 number を Ming ら か に す る こ と で あ る. つ ぎ に ク ロ ー ン change し た heritage 伝 sub-fields の salt base with column を Ming ら か に す る こ と に よ り, whole V_ lambda heritage 伝 son fragment の match column を interpret し, whole ヒ ト antibody heritage 伝 son を カ タ ロ グ change す る. All ヒ ト antibody heritage 伝 son の カ タ ロ グ は, あ ら ゆ る antibody を heritage 伝 sub engineering に produce す る た め の important topic な で あ る. During this study period, the に and all V_λ -positron 伝 substal globules were successfully equalized に by ロ and <s:1> た. ま た, ク ロ ー ン change し た full て の field に masato し て Eco RI お よ び Hin dIII を with い limitations て enzymes to 図 を made し た. 4 の representative な V_ lambda heritage 伝 son プ ロ ー ブ を with い て サ ザ ン ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン parsing line を っ た と こ ろ, V_ lambda heritage 伝 stroma は 866 KB の き さ で あ り, こ の field に は V_ lambda プ ロ ー ブ と ハ イ ブ リ ダ イ ズ す る Eco RI - Hin dIII fragments が69 exist する とが とが determine た. V_ lambda posthumous son 伝 に masato し て さ ら に detailed analytical を に into め る purpose で, こ れ ら 69 の Eco - Hin dIII fragment を プ ラ ス ミ ド ベ ク タ ー に サ ブ ク ロ ー ン change し た. Most こ の う ち も high-class に position す る nine の fragment, total 30 KB の salt base with column を Duan Jie を owe loss import method using い て decided し た と こ ろ, こ の field に 2 の V_ lambda heritage 伝 son fragment お よ び seven の V_ lambda pseudo heritage 伝 son fragment を 発 see し た. Youdaoplaceholder1 れら <s:1> V_λ remnant 伝 fragment <e:1> うち <e:1> one patient with <s:1> demedulatory peripheral neuropathy ら isolated された self-antibody remnant 伝 であった. Now, he の て の V_ lambda heritage 伝 son の salt base with column を decided す べ く ゲ ノ ム DNA シ ー ケ ン シ ン グ を line っ て い る.