RNAポリメラーゼII転写機構に対する自己免疫応答に関する分子免疫学的研究

RNA 聚合酶 II 转录机制自身免疫反应的分子免疫学研究

• 批准号: 07770340
• 负责人: 平形 道人
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770340/
• 关键词: 自己免疫疾患; 自己抗原; 自己抗体; 転写因子; エピトープ; 強皮症

本年度は転写機構で重要な役割を果たすRNAポリメラーゼII(RNAP II)に対する自己抗体の免疫学的性状を分子生物学的手法で追求した。【方法】(1)免疫沈降法でRNAP IIサブユニットと反応した抗RNAP II抗体陽性の強皮症15例を対象、全身性エリテマトーデス(SLE)、多発性筋炎(PM)、健常人の446例を対照とした。(2)免疫沈降反応により、RNAP II largeサブユニットのリン酸化型、脱リン酸化型との反応性を調べた。さらに、18アミノ酸からなるCTD合成ペプチド{NH_2(YSPTSPS)_2-YSPT-amide}を添加し、かかる反応に対する抑制活性を検討した。(3)cDNA^<CTD>をpGEX-2Tに組み換え、融合蛋白とし発現、同抗体との反応性を免疫ブロット法で調べ、精製220kDa蛋白との反応性と比較した。(4)同抗体によるin vitro translationで発現したヒトRNAP II 23、33kDaサブユニット蛋白の反応性を検討した。【結果】(1)抗RNAP II抗体陽性15例は全例リン酸化型、脱リン酸化型の両サブユニットを確認した。合成ペプチドによる免疫沈降反応抑制試験では、11例中8例(5例で完全、3例で部分的)に抑制が認められた。かかる例では、両サブユニットの反応が抑制された。(2)免疫ブロット法で精製220kDaサブユニットを認識した11例全例がCTD融合蛋白と反応した。一方、全身性エリテマトーデス、多発性筋炎患者、健常人からの対照血清は同蛋白と反応しなかった。(3)15例中13例が23kDaサブユニットを免疫沈降したが、全例33kDaサブユニットとは反応しなかった。【結語】抗RNAP II抗体はRNAP II-220kDaサブユニットのリン酸化型、脱リン酸化型の両サブユニットCTDを認識した。また、23kDaサブユニットにも主要な抗体結合部位の存在が示唆された。

This year, we will continue to pursue molecular biological approaches to the study of the immunologic properties of antibodies against human immunodeficiency virus (HCV). [Methods](1) Immunoprecipitation method was used to detect RNAP II antibody in 15 patients with scleroderma, systemic sclerosis (SLE), multiple tendonitis (PM) and 446 healthy individuals. (2)Immunoprecipitation reaction, RNAP II large enzyme reaction, deacidification reaction, and anti-inflammatory reaction The inhibition activity of CTD synthesis by addition of NH_2(YSPTSPS)_2-YSPT-amide was investigated. (3)cDNA^<CTD>pGEX-2T protein expression, fusion protein development, antibody and anti-activity, immune regulation, purification of 220kDa protein and anti-activity comparison. (4)The same antibody was found in vitro translation. RNAP II 23, 33kDa protein was detected. [Results](1) 15 cases were positive for anti-RNAP II antibody, and all cases were confirmed to be acidified and deacidified. 8 of 11 cases (5 cases completely, 3 cases partially) were inhibited by synthetic immune sedimentation inhibition test.かかる例では、両サブユニットの反応が抑制された。(2)11 cases of CTD fusion protein were identified by purified 220kDa CTD fusion protein. A prescription, systemic, multiple tendonitis patients, healthy people, anti-serum anti-protein (3)15 13 of them were 23kDa and all of them were 33kDa. [Conclusion] Anti-RNAP II antibodies recognize RNAP II-220kDa protein and protein forms. The presence of a major antibody binding site is indicated by the presence of a 23kDa protein.