血友病変異病型における異常第VIII因子の生化学的・分子生物学的研究

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1.multi-ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)による異常第VIII因子の検出われわれは5種類の認識部位の明らかな抗第VIII因子モノクローナル抗体を組み合わせたサンドイッチELISA法を確立し、34名の血友病A^+もしくはA^R患者においてそれぞれの抗原量を測定した。34名中1名の軽症患者(第VIII因子活性12%)でL鎖C_2領域を認識するNMC-VIII/5を含む組合せにおいてのみ明らかに低い抗原量(他は8%あるのに対し、1%未満であった)を示した。このことから、この患者の第VIII因子はL鎖C_2領域に何らかの異常を有するものと推測された。2.異常第VIII因子のvWFに対する結合能の検討正常vWFに対する本患者の第VIII因子の結合能は正常第VIII因子のそれに比し明らかな差は認めなかった。これは本患者の第VIII因子の異常部位がvWF結合部位(アミノ酸2308-2312の領域に存在すると推定されている)の近傍にはないことを示唆している。3.異常第VIII因子の遺伝子異常の検討これらの蛋白生化学的特性の結果をもとに、異常のあると思われるL鎖C_2領域にターゲットを絞り、PCRによるDNA増幅、SSCP(single strand conformation polymorphism)解析、塩基配列シークエンシングを行った。その結果、本患者の第VIII因子遺伝子は2159番目のarginineがcysteineに置換しているmissense mutationであることが判明した。このように、本研究は異常第VIII因子を生化学的・分子生物学的に解析する上で、非常に意義のあるものであると思われる。