血友病変異病型における異常第VIII因子の生化学的・分子生物学的研究

血友病突变型异常因子 VIII 的生化和分子生物学研究

• 批准号: 07770597
• 负责人: 田中 一郎
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770597/
• 关键词: 血友病A; 第VIII因子; ELISA; vWF; SSCP; PCR

1.multi-ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)による異常第VIII因子の検出われわれは5種類の認識部位の明らかな抗第VIII因子モノクローナル抗体を組み合わせたサンドイッチELISA法を確立し、34名の血友病A^+もしくはA^R患者においてそれぞれの抗原量を測定した。34名中1名の軽症患者(第VIII因子活性12%)でL鎖C_2領域を認識するNMC-VIII/5を含む組合せにおいてのみ明らかに低い抗原量(他は8%あるのに対し、1%未満であった)を示した。このことから、この患者の第VIII因子はL鎖C_2領域に何らかの異常を有するものと推測された。2.異常第VIII因子のvWFに対する結合能の検討正常vWFに対する本患者の第VIII因子の結合能は正常第VIII因子のそれに比し明らかな差は認めなかった。これは本患者の第VIII因子の異常部位がvWF結合部位(アミノ酸2308-2312の領域に存在すると推定されている)の近傍にはないことを示唆している。3.異常第VIII因子の遺伝子異常の検討これらの蛋白生化学的特性の結果をもとに、異常のあると思われるL鎖C_2領域にターゲットを絞り、PCRによるDNA増幅、SSCP(single strand conformation polymorphism)解析、塩基配列シークエンシングを行った。その結果、本患者の第VIII因子遺伝子は2159番目のarginineがcysteineに置換しているmissense mutationであることが判明した。このように、本研究は異常第VIII因子を生化学的・分子生物学的に解析する上で、非常に意義のあるものであると思われる。

1. Detection of abnormal factor VIII by multi-ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay). Detection of 5 kinds of recognized sites and anti-factor VIII antibodies. One of the 34 patients (factor VIII activity 12%) had a low level of L-lock C_2 domain recognition (NMC-VIII/5), which was 8% higher than that of the control group. The factor VIII of the patient is the abnormal factor in the L-lock C_2 domain. 2. Abnormal Factor VIII binding energy compared to normal Factor VIII binding energy This indicates that the abnormal site of factor VIII in this patient is the vWF binding site (putative presence in the domain of amino acids 2308-2312) and the vicinity thereof. 3. Analysis of abnormal gene expression of factor VIII and the results of biochemical characterization of the protein, detection of abnormal gene expression, PCR amplification, single strand conformation polymorphism (SSCP) analysis, and gene alignment. As a result, the factor VIII gene of this patient was identified at 2159 points by arginine and cysteine substitution. This study focuses on the biochemical and molecular analysis of factor VIII.

项目成果

Midori Shima,et al.: "Common inhibitory effects of human anti-C_2 domain inhibitor alloantibodies on factor VIII binding to con willebrand factor" British Journal of Haewatology. 91. 714-721 (1995)

Midori Shima 等人：“人抗 C_2 结构域抑制剂同种抗体对 VIII 因子与 con willebrand 因子结合的常见抑制作用”英国血液学杂志。

田中一郎,他: "先天性凝固異常症" 日常診療と血液. 5. 57-63 (1995)

Ichiro Tanaka 等：“先天性凝血病”日常医疗实践和血液 5. 57-63 (1995)。

田中一郎,他: "血友病の出生前診断" 小児科診療. 58. 2065-2070 (1995)

Ichiro Tanaka 等人：“血友病的产前诊断”儿科学 58。2065-2070 (1995)

Midori Shima,et al.: "Measurement of anti-factor VIII IgG,IgG4 and IgM alloantibodies in previously untreated homophilia A potents Treated with recombinantfactor VIII" International Journal of Hewatology. 62. 35-43 (1995)

Midori Shima 等人：“用重组因子 VIII 治疗的先前未治疗的同性恋 A 强者中抗因子 VIII IgG、IgG4 和 IgM 同种抗体的测量”国际血液学杂志。

田中一郎,他: "血友病の出生前診断" Biomedical Perspectiues. 4. 35-39 (1995)

Ichiro Tanaka 等人：“血友病的产前诊断”《生物医学观点》4. 35-39 (1995)。