てんかんモデル(El)マウス脳のポリ(A)結合蛋白質の構造についての研究

癫痫模型(El)小鼠脑中poly(A)结合蛋白的结构研究

• 批准号: 07770795
• 负责人: 木岡 哲郎
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770795/
• 关键词: てんかん; ポリ(A)結合蛋白質; 転写; mRNA

Elマウスは放り上げ刺激を加えることによって痙攣が誘発される自然発症てんかんモデルであり、いままでに、神経伝達物質の異常、mRNAの代謝異常が研究されているが、その病因を指摘するまでには至ってない。既に、Elマウス固有の痙攣発作によって、polyadenylationの低下、ポリ(A)結合蛋白の結合活性の低下を明らかにした。今回は、ポリ(A)結合蛋白の構造について研究した。痙攣直後と発作間欠期のElマウス脳から調整した核蛋白でゲルシフト分析を行った。核蛋白に^<32>Pで標識したポリ(A)のプローブを加え結合させて、ポリアクリルアミドゲルの電気泳動を低温室にて槽をペリスタポンプで灌流しながら行った。核酸-蛋白複合体は、フリーのプローブから2種の蛋白のバンドに分離された。分子量のより高いと考えられる蛋白のバンドが、痙攣後に消失することが判明した。ゲルシフト分析のゲルより、バンド部分の蛋白を抽出し、オリゴ-dt-カラムを使用して部分精製した。SDS-ポリアクリルアミド電気泳動では16K以上と考えられたが、完全には精製できなかった。ただ、結合活性の低下は、高分子量のポリ(A)結合蛋白の変化によるものと予測でき、poly(A)^+mRNAの翻訳活性にも影響を与えることが考えられる。痙攣発作で種々の蛋白の変化が報告されているが、その一因と推測する。今後は、この蛋白を完全精製するとともに、抗体を作成し、脳内での分布をイムノブロットにて検討したいと考えている。

The study of abnormal metabolism of mRNA, abnormal expression of substances in the brain and abnormal expression of genes in the brain, and the study of the etiology of the disease. The decrease of polyadenylation and the decrease of binding activity of protein (A) binding are obvious. The structure of binding protein is studied in this paper. The analysis of nuclear protein was carried out in the late stage of development. The <32>nuclear protein is identified by the protein (A), and the protein (A) is expressed by the protein (A). Nucleic acid-protein complexes were isolated from two proteins. The molecular weight of the protein is high, and the protein disappears after spasm. The protein in the sample was extracted from the sample, and the protein in the sample was refined by using the sample. SDS-16K or higher, completely refined Low binding activity, high molecular weight poly (A) binding protein conversion, prediction, poly(A)^+mRNA conversion activity The protein transformation of convulsive development is reported in this paper, and one of the factors is postulated. In the future, the protein will be completely purified, the antibody will be produced, and the distribution in the body will be examined.