トランスジェニックマウスによるGAD遺伝子機能の解析

使用转基因小鼠分析 GAD 基因功能

• 批准号: 07771131
• 负责人: 浅田 英穂
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771131/
• 关键词: グルタミン酸脱炭酸酵素(GAD); GABA

グルタミン脱炭素酵素(GAD)は、グルタミン酸からγアミノ酪酸(GABA)を生成する酵素であり、中枢神経系において抑制性神経伝達物質であるGABAニューロンに存在する。GADにはGAD65とGAD67の2種(分子量が65kDaと67kDa)があるが、申請者はシナプスへの局在がより明らかなGAD65についてのトランスジェニックマウス作成に際して、まずマウスGAD65 cDNAのクローニングを行なった。マウス脳cDNAライブラリー(λgt10ファージ)よりRT-PCRにて作成した0.3kbpのマウスcDNAをプローブとしてスクリーニングを行い、1.4kbpおよび2.2kbpの2種類のGAD65cDNAクローンを得た。それぞれのクローンについてシークエンスを行いマウスGAD65cDNAの全長の塩基配列(2761bp、585アミノ酸)を決定した。トランスジェニックマウス作成の予備実験として、培養系を用い神経系細胞であるNeuro2aおよび非神経細胞であるCHO細胞にGAD65cDNAをそれぞれトランスフェクトしGAD65発現株を確立し、GADの細胞内局在およびGABAの生成、分泌に関して検討した。GAD65cDNAによるGABA合成を確認した後、前脳神経細胞に特異的に発現可能なカルモジュリンキナーゼIIαプロモーター(8.5kbp)を有するトランスジェニック用発現ベクター(PNN279)にGAD65cDNAを組み込み、トランスジェニックコンストラクトを作成した。さらにES細胞を用いたキメラマウス作成のために、薬剤耐性遺伝子であるpuromycin N-acetyl transferase gene(pac)を、現在ベクターに組み込み中である。

Decarbonizing enzyme (GAD), acid, gamma-ray, butyric acid (GABA), enzyme production, central nervous system, inhibitive god, enzyme, GABA, acid, acid, butyric acid, butyric acid, tyrosine, deoxyribonucleic acid, deoxyribonucleic acid, deoxyribonuclease, γ-methylol, butyric acid, tyrosine acid, γ-methyloxylic acid, butyric acid, tyrosine acid, γ-butyric acid, butyric acid, γ- GAD GAD65 GAD67 2 (molecular weight: 65kDa67 kDa), applicants

项目成果

H.Asada 他: "Molecular cloning of mouse glutamic acid decarboxylase and GADA release from cDNA-transfected cells" Society for Neuroscience(abstracts). 21. 1298-1298 (1995)

H. Asada 等人：“小鼠谷氨酸脱羧酶的分子克隆和 cDNA 转染细胞中的 GADA 释放”神经科学学会（摘要）21. 1298-1298 (1995)。