フローサイトメトリーによる前立腺癌アポトーシス細胞の定量的解析-針吸引生検による内分泌療法前後の経時的変化の検討-

通过流式细胞术对前列腺癌凋亡细胞进行定量分析 - 通过针吸活检检查内分泌治疗前后的时间变化 -

• 批准号: 07771289
• 负责人: 水谷 隆
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771289/
• 关键词: アポトーシス; フローサイトメトリー; TdT法; MTT法; 前立腺癌; LNCaP; Dihydrotestosterone; 5-FU

HL60を用いた予備実験において、5×10^5/ml・2mlにcamptothecin (CAM) 2μg/mlを3時間作用させた所、CAMないしTdT不存在の陰性対照では単峰性のピークを示したがCAM及びTdT添加群では2峰性のピークが認められ、フローサイトメトリーによるTdT法のアポトーシス細胞検出能が確認された。前立腺癌の患者数が少なく臨床検体の評価が困難となり、代わりにホルモン感受性ヒト前立腺癌培養細胞株LNCaPを用いた検討を行った。5α-dihydrotestosterone (DHT) 1×10^<-10>M添加及び無添加群に5-FUを13ng/ml〜130μg/ml添加し、1、3、6、24時間及び6日間接触させMTT法で細胞増殖阻害率を測定し、更にTdT法にてFITC標識しPIにてDNA染色の上二重蛍光分析を行った。5-FUは濃度依存性および時間依存性に作用し、DHTの有無によらず上記各接触時間でのIC50は1.5×10^<-3>M、2.5×10^<-4>M、1.5×10^<-4>M、3×10^<-5>M及び3×10^<-6>Mであった。次いで5-FU1mMを24時間接触させ、直ちにないし24及び48時間培養後固定したものを測定した。各細胞生存率は、DHT添加群で93〜98%、35〜47%、17〜19%、無添加群で94〜98%、39〜79%、30〜45%で両群に差が見られず、DHTは5-FUの感受性に影響を与えないと考えられた。一方、FITC蛍光強度は24時間接触直後では対照と有意差を認めなかったが,更に24時間培養したDHT無添加群で上昇しアポトーシスの誘導が検出された。DHT添加群では不明瞭であった。48時間後では両群とも細胞の変性が見られた。DHT無添加群は、臨床的にはホルモン療法施行例に相当する。本法の針吸引生検検体への応用も可能と思われた。

HL60 was prepared with 5×10^5/ml·2ml of camptothecin (CAM) 2μg/ml for 3 hours. The negative control of CAM and TdT did not exist. The negative control of CAM and TdT added to the group showed that CAM and TdT did not exist. The number of patients with advanced adenocarcinoma is low, and clinical evaluation is difficult. 5α-dihydrotestosterone (DHT) was added at 1×10^<-10>M and not added at 13ng/ml ~ 130μg/ml of 5-FU at 1, 3, 6, 24 hours and 6 days of exposure. The inhibition rate of cell proliferation was measured by MTT assay, and the TdT assay was used for FITC labeling and PI staining. 5-FU has concentration-dependent and time-dependent effects. The IC50 of DHT is 1.5×10^<-3>M, 2.5× 10 ^<-4>M, 1.5 × 10 ^<-4>M, 3×10^ M <-5>and 3×10^<-6>M. 5-FU was measured at 1mM after 24 hours of exposure, 24 hours after incubation, and 48 hours after incubation. The survival rate of each cell was 93 ~ 98%, 35 ~ 47%, 17 ~ 19%, 94 ~ 98%, 39 ~ 79%, 30 ~ 45% in DHT added group and DHT added group respectively. A side, FITC light intensity after 24 hours of exposure to light, but also 24 hours of culture without the addition of group rise in the induction of light DHT added group. After 48 hours, the cells of the group were transformed into cells. DHT is not added to the group, and the clinical application of DHT is equivalent to that of DHT. This method can be used to attract the attention of the user.