肝内胆管上皮細胞培養系を用いた胆道閉鎖症での胆管発生機序の解析
肝内胆管上皮细胞培养系统分析胆道闭锁胆管发育机制
基本信息
- 批准号:07857048
- 负责人:
- 金额:$ 0.58万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1995
- 资助国家:日本
- 起止时间:1995 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
今回我々は,少量のヒト肝組織から肝内胆管上皮細胞を分離・培養することにより胆道閉鎖症における胆管上皮細胞の性質やその異常をin vitroで検討することを計画した。まず予備実験としてラット肝からの胆管上皮細胞の単離および培養を行ったが,従来報告されていた潅流消化後のPercoll溶液による遠心分離法では細胞の回収,viabilityとも不良なため,collagen-coated dish上で培養しても胆管上皮細胞の生着がみられなかった。またモノクローナル抗体を用いたイムノビーズ法によっても胆管上皮細胞を十分に回収することはできず,よってこれらの方法により少量のヒト肝組織から胆管上皮細胞を分離・培養することは不可能と判断した。そこでラット肝をcollagenase溶液で潅流・消化したのち肝実質細胞を除去して“portal tree"を作製し、そのままcollagen gelにてpre-cultureを行う方法に変更した(Okamoto et al, Hepatology 1995)。この方法では約1週間後にgelごと消化して線維芽細胞を除去することにより胆管上皮細胞のviabilityを保ったまま単層培養することが可能となった。次にヒト肝組織への応用として、肝移植レシピエントの摘出肝の一部を用いて肝管上皮細胞分離を試みた(東北大学医学部第3内科・真野浩先生との共同実験)。この場合肝組織は十分量入手可能であるが,collagenase溶液による潅流・消化が不可能であるため、肝組織から肝実質細胞を機械的に剥離して“portal tree"を作製した。しかし今回の患児が肝道閉鎖症術後肝硬変であったため肝組織中の線維増生が著しく,ラットのように十分な“portal tree"が得られず,胆管上皮細胞の単離は不成功に終わった。今後は組織消化を工夫して,肝移植レシピエントの摘出肝,さらにはより少量の胆道閉鎖症初回根治術時肝生検組織からヒト胆管上皮細胞を分離培養し,in vitroで患児胆管上皮細胞の性質や各種の成長因子に対する反応を調べる予定である。
This time, a small amount of liver tissue was isolated from the intrahepatic bile duct epithelial cells. The bile duct epithelial cells were isolated. The bile duct epithelial cells were isolated from the biliary tract. The bile duct epithelial cells were divided into normal in vitro cells and normal biliary epithelial cells. Please tell me that the bile duct epithelial cells of the liver are isolated from the bile duct epithelial cells, so as to report that the bile duct epithelial cells of the bile duct epithelial cells are infected by Percoll solution after flow digestion, viability bad cells and bile duct epithelial cells. The antibody was detected by Elisa. The bile duct epithelial cells were highly sensitive, and the liver tissue was isolated from the bile duct epithelial cells. It was impossible to determine whether the bile duct epithelial cells were isolated. The collagenase solution of the liver was digested by flow, and the cells of the liver were removed. The "portal tree" was used as the cell, and the collagen gel was used as the pre-culture. The method was more sensitive (Okamoto et al, Hepatology 1995). The gel method was used to remove the bile duct epithelial cells after gel digestion. The bile duct epithelial cells were removed and the bile duct epithelial cells were protected. In the second stage, the liver tissue was used to extract the liver tissue, and the liver transplantation was used to remove the liver. The isolation test of hepatic duct epithelium was performed (Mr. Hiroshi Makano, Department of Internal Medicine, Peking University). The liver tissue may be affected by 10% of the total amount of collagenase solution, but it is impossible for the liver tissue to remove the portal tree from the liver tissue. After suffering from the disease of hepatic tract disease this time, the liver tissue of patients with liver cirrhosis was suffering from severe hepatitis, the liver tissue was infected with severe hepatitis, and the bile duct epithelial cell isolation was not successful. In the future, the liver was removed after liver transplantation. When a small amount of biliary tract disease was cured, the bile duct epithelial cells were isolated from the liver tissue and the bile duct epithelial cells were isolated and cultured in in vitro. The growth factors of bile duct epithelial cells were determined by Elisa.
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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