BCG-cytokine fusion proteinによる膀胱癌治療

本年度は昨年度に続き、超音波粉砕器を用いたsonicationにより、BCG菌体蛋白成分の分離、精製を一層進め、SDS-pageにて検討を行った。この段階において、sonicationを行う際の使用するBCGの菌量、sonicationの条件を昨年度より、さらに検討した。in vitroでのCTL誘導実験において、より高い抗原性を有する蛋白の同定に勤めた。また、複数のBCG菌株を用い、同様の実験を行ったが、その抗原性等については、ことさら大きな菌株間の差は認められなかった。BCG菌体蛋白成分をSDS-PAGEにより分離、精製したものより、最も抗原性の高い部分のアミノ酸配列を一部決定できたが、今後さらなる検討が必要と思われた。BCG蛋白、サイトカインをコードする遺伝子を有するプラスミドの作製のため、必要なベクター、cDNAの入手を完了し、プラスミドの作製を行い、大腸菌(コンピテン細胞)に導入を行った。まず予備実験として、BCGの菌体成分でもあり、その生化学的、免疫学的性状の判明しているheat shock protein(HSP60)とサイトカイン遺伝子としてIL-2を用いプラスミドを作製した。このプラスミドを大腸菌に導入し、fusion proteinの産生を試みたが、現在までに目的とするfusion proteinの産生までにはいたっていない。今後さらに研究を継続する予定である。

本年度は昨年度に続き、超音波粉砕器を用いたsonicationにより、BCG菌体蛋白成分の分離、精製を一層進め、SDS-pageにて検討を行った。この段階において、sonicationを行う際の使用するBCGの菌量、sonicationの条件を昨年度より、さらに検討した。in vitroでのCTL誘導実験において、より高い抗原性を有する蛋白の同定に勤めた。また、複数のBCG菌株を用い、同様の実験を行ったが、その抗原性等については、ことさら大きな菌株間の差は認められなかった。BCG菌体蛋白成分をSDS-PAGEにより分離、精製したものより、最も抗原性の高い部分のアミノ酸配列を一部決定できたが、今後さらなる検討が必要と思われた。BCG蛋白、サイトカインをコードする遺伝子を有するプラスミドの作製のため、必要なベクター、cDNAの入手を完了し、プラスミドの作製を行い、大腸菌(コンピテン細胞)に導入を行った。まず予備実験として、BCGの菌体成分でもあり、その生化学的、免疫学的性状の判明しているheat shock protein(HSP60)とサイトカイン遺伝子としてIL-2を用いプラスミドを作製した。このプラスミドを大腸菌に導入し、fusion proteinの産生を試みたが、現在までに目的とするfusion proteinの産生までにはいたっていない。今後さらに研究を継続する予定である。