メタロチオネインの骨における発現と骨疾患での生理的役割の解明

阐明金属硫蛋白在骨中的表达及其在骨疾病中的生理作用

• 批准号: 07857132
• 负责人: 青木 千春
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857132/
• 关键词: メタロチオネイン; 骨芽細胞株MC3T3-E1; カドミウム; RT-PCR

骨におけるメタロチオネイン(MT)mRNAの発現の検討本研究では骨細胞の特性を保持した株細胞としてマウス頭蓋冠由来の骨芽細胞株MC3T3-E1を用いた。・RT-PCR法を用いたMTmRNAの検出骨芽細胞株MC3T3-E1にカドミウム(CdCl_2)を10μM投与して24時間培養後全RNAを抽出し,すでに設計したMTmRNAコンセンサスPCRプライマーを用いてRT-PCRを行ったところ,コントロールと比較して明らかにカドミウムの刺激によってMTmRNA発現量が増大していることがわかった。・培養日数にともなうMTmRNA発現量の変化MC3T3-E1を5×10^5dish(φ90mm)で播き込み,1,3,7,14日培養後にそれぞれCdCl_2を10μM投与し24時間後に全RNAを抽出してRT-PCRを行い増幅産物を定量的に解析した。その結果,ほぼコンフルエントとなる7日目まで発現量は緩やかに上昇した。また,MC3T3-E1の培養においてその石灰化を促進させるといわれているβ-グリセロリン酸ナトリウム(β-GP)を添加して同様に培養日数ごとにCdCl_2を投与したところ,mRNAの発現量はβ-GPなしの状態よりも急激に7日目まで上昇した。このことから石灰化が盛んな細胞ほどMTmRNAの発現能が高いのではないかということが示唆された。現在MC3T3-E1細胞の石灰化についての指標を検討し,MTmRNA発現量との相関についてさらに確証を得る為の研究を進めている。

Bone germ cell line MC3T3-E1 was used in this study to maintain the characteristics of bone cell and to maintain the crown of bone bud cell line MC3T3-E1 from bone bud cell line (MT). The RT-PCR method was used to extract the bone bud cell line MC3T3-E1