ナノ・ランタンマウスを用いた、新規Vil1-Creマウスの遺伝子欠損効率の評価

利用纳米灯笼小鼠评价新型Vil1-Cre小鼠的基因缺失效率

• 批准号: 17H00593
• 负责人: 青木 千春
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: Oita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00593/
• 关键词: Crcドライバー; in vivoイメージング; 組織特異的遺伝子発現

組織特異的遺伝子欠損マウスの作製にはCreドライバーと呼ばれる組織特異的プロモーター下でCreリコンビナーゼを発現するトランスジェニックマウスが必要である。新規Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc)マウスは、理化学研究所で開発された、マウス腸幹細胞特異的なvillin1プロモーター領域をBACライブラリーで構築したCreマウスで、従来より生理的な腸管上皮特異的Creリコンビナーゼの発現が期待されたが、このマウスの腸上皮特異的遺伝子欠損効率は未だに検証されていなかった。そこで、本研究では当マウスの遺伝子欠損効率を評価した。まず、新規Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc)マウスあるいは既存のVil1-Creマウスとナノ・ランタンマウスを交配し、得られたマウスのCreの発現を蛍光、発光およびPCRで解析した。ナノ・ランタンマウスは、Cre遺伝子が発現すると蛍光タンパク質Venusおよび発光タンパク質Renilla Luciferaseの遺伝子が発現し、蛍光および発光でその発現を観察することができる。in vivoイメージングの結果、既存のVil1-Creマウスは、腹部に限局した発光が観察されたが、新規Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc)マウスは、全身に発光が観察された。続いて、脾臓細胞をフローサイトメトリー法で観察したところ、既存のVil1-Creマウスおよびそのコントロールマウスの脾臓細胞には、Venusの発現はみられなかったが、新規Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc)マウスの脾臓細胞はコントロールマウスに比べ顕著なVenusの発現がみられた。最後に、各臓器でのCreの発現をPCR法で検討した。CreによりFlox遺伝子が欠損するとPCR産物が増幅できなくなるプライマーをデザインし検定を試みた。その結果、既存のVil1-Creマウスは、小腸および大腸にのみ遺伝子の欠損がみられたが、新規Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc)マウスでは、小腸および大腸に加え、解析した全ての臓器(尻尾、筋肉、肝臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、脳)で遺伝子の欠損がみられた。以上の結果より、既存のVil1-Creマウスは、小腸および大腸で特異的にCre遺伝子が発現しているが、新規Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc)マウスは、全身で非特異的にCre遺伝子が発現していることが明らかになった。

Tissue-specific gene deficiency is a necessary condition for tissue specific gene deficiency. The new regulation Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc) was developed by the Institute of Physical and Chemical Sciences to construct Cre 1-Cre(Tg (Vil 1-cre) 2Utr/Rbrc) specific to intestinal stem cells. This study is to evaluate the effectiveness of the genetic algorithm. The new regulation Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc) can be used to analyze the existing Vil1-Cre. In the case of Naantaranma, the Cre gene will be discovered, and the genes of Venus and Renilla Luciferase will be discovered, and the discoveries of Venus and Renilla Luciferase will be observed. In vivo, the results of the test, existing Vil1-Cre, abdominal limit, detection, new Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc), detection, whole body detection. The new regulation Vil 1-Cre(Tg(Vil 1-cre)2Utr/Rbrc) is used to detect the presence of Vil1-Cre in spleen cells. Finally, the detection of Cre by PCR was investigated. Cre: Flox gene loss and PCR product amplification The results show that the existing Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc) is not enough for the small intestine and large intestine, and the analysis is not enough for the whole organ (tail, muscle, liver, spleen, kidney, heart, lung). As a result, existing Vil1-Cre (Tg(Vil1-Cre) 2Utr/Rbrc), small intestine and large intestine specific Cre genes were found, new Vil1-Cre(Tg(Vil1-cre)2Utr/Rbrc), whole body non-specific Cre genes were found,

项目成果

アンピシリンとバンコマイシン投与による腸内細菌叢とグルタミン酸、酪酸代謝経路の異常が腸炎を誘導する

氨苄青霉素和万古霉素给药引起的肠道菌群以及谷氨酸和丁酸代谢途径的异常可诱发肠炎。

• 发表时间: 2017
• 作者: 園田光;玄同淑子;尾崎貴士;野口香緒里;広瀬晴奈;佐知望美;神山長慶;飛彈野真也;水上一弘;村上和成;小林隆志
• 通讯作者: 小林隆志

T細胞特異的TRAF6欠損マウスは実験的自己免疫性脳脊髄炎の発症が抑制される

T细胞特异性TRAF6缺陷小鼠抑制了实验性自身免疫性脑脊髓炎的发展

• 发表时间: 2018
• 作者: Naganori Kamiyama;Benjawan Saechu;Shinya Hidano;Kei Watanabe;Hidekazu Matsuoka;Kaori Noguchi;Yoshiko Gendo;Takashi Ozaki;Akira Sonoda;Nozomi Sachi;Yuki Eshita;Takashi Kobayashi
• 通讯作者: Takashi Kobayashi