魚類ビテロゲニンの卵黄蛋白への分子解裂に関わる酵素の検索

寻找参与鱼卵黄蛋白分子裂解为蛋黄蛋白的酶

• 批准号: 08660243
• 负责人: 原 彰彦
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660243/
• 关键词: ビテロゲニン; リポビテリン; β′-コンポーネント; サケ科魚類; カテプシンD; 卵黄形成

1.ビテロゲニン分解酵素の検出法の確立:卵黄形成期のアメマスを用い,ビテロゲニン分解酵素の検出法を確立した。精製ビテロゲニンをビオチン標識し,卵水溶性画分(WSF)を加えた後,37℃,pH5.2で16時間インキュベートした。分解産物をゲル濾過およびSDS-PAGEに供し,ペルオキシターゼ標識アジビン,または抗リポビテリン血清および抗β′-コンポーネント血清によるWestern blottingを行った。その結果,精製ビテロゲニンは卵黄蛋白であるリポビテリンおよびβ′-コンポーネントのサブユニットと分子量および抗原性を同じくするポリペプタイドに分解された。2.卵抽出液の分画および分解酵素の性状解析:卵黄形成途上のサクラマス卵を材料とし,卵抽出液を水沈殿法および硫安塩析,さらにDE-52,ハイドロキシルアパタイト,フェニルスーパーロース,モノQ,スーパーロース12によるカラムクロマトグラフィーに順次供し,精製ビテロゲニン分解酵素を得た。各分画のビテロゲニン分解酵素の検索は上述のSDS-PAGEによる検出法を用いて行った。精製酵素をSDS-PAGEに供した結果,42kDaの位置に一本のバンドが観察され,このバンドは抗ヒトカテプシンDに反応した。さらにWSFに蛋白分解酵素阻害剤を添加し,ビテロゲニン分解活性に対する阻害性を観察した結果,この活性はペプスタチンAによってのみ特異的に阻害された。以上のことより,サケ科魚類の卵黄形成期の卵中にはカテプシンD様酵素が存在し,ビテロゲニンの分子解裂に関与することが強く示唆された。

1. The method of decomposing enzymes of ビテロゲニン is established: the method of degrading enzymes of ビテロゲニン is used in the yolk formation period. Refined ビテロゲニンをビオチン logo, egg water-soluble fraction (WSF) and えた, 37℃, pH5.2, 16 time インキュベートした. Decomposition products をゲルfiltered およびSDS-PAGEにsupplyし,ペルオキシターゼlabel アジビン, またはanti-リポビテリンserum およびanti-β′-コンポーネントserum によるWestern blottingを行った.その results, refined ビテロゲニンは yolk protein であるリポビテリンおよびβ′-コンポーネントのサブユニットと Molecular weight および Antigenicity を Same as じくするポリペプタイドに decomposition された. 2. Analysis of the properties of egg extract liquid's analyzable enzyme: yolk formation on the way to yolk formationをMaterial とし, egg extraction liquid をwater Shen Dianfa および sulfur anhydride analysis, さらにDE-52, ハイドロキシルアパタイト,フェニルスーパーロース,モノQ,スーパーロース12によるカラムクロマトグラフィーにSupplied in sequence, refined ビテロゲニン catalytic enzyme is obtained. Each section is based on the above-mentioned SDS-PAGE decomposition method of decomposing enzymes. The result of purified enzyme is provided by SDS-PAGE, the position of 42kDa is the same as the original enzyme, and the enzyme is anti-oxidant.さらにWSFにProteolytic enzyme inhibitor is added, ビテロゲニン decomposition activity に対する inhibitor The result of the sexual examination is the result of the activity, and the specific activity is the specific damage. The above のことより, サケ family fish yolk formation period in the egg にはカテプシンD様zymation The existence of the element, the cleavage of the molecule of the ビテロゲニンの, and the strong することが强くshow the instigation of the された.

项目成果

平松 尚志: "アメマス(Salvelinus leucomaenis)ビテロゲニンの卵黄蛋白への特異的分解" 日本誌. 63・4(印刷中). (1997)

Takashi Hiramatsu：“Salvelinus leucomaenis 卵黄蛋白的特异性降解”，Japan Journal 63, 4（出版中）。