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魚類ビテロゲニンの合成及び取り込み気候に関する免疫生化学的研究

鱼类卵黄蛋白原合成及摄取环境的免疫生化研究

基本信息

批准号：
09460092
负责人：
原彰彦
金额：
$ 5.5万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞培養系を用いたVg合成:ウナギ肝の初代培養系を用いてVg合成能の挙動を調べた結果,雄肝細胞ではE2に対するVg合成は見られず,雌肝では顕著なVg合成が確認された。E2とサケ下垂体,また成長ホルモン及びプロラクチンの添加も,E2の単独添加に比べ効果的であった。卵母細胞の生体外卵黄形成:ウナギ卵母細胞の生体外培養系を用いて,卵黄形成を進行させ,Vgの取り込み制御因子に関して解析を行った。培養系にサケ下垂体糖蛋白画分(SPG)を添加した結果,培養開始から短時間でVgの取り込みが開始され,未発達の卵母細胞にも卵黄形成が誘導された。海産魚Vgの成熱に伴う変動:カンパチ,キジハタ及びトラフグの雌またE2処理魚血清からVgを精製し,測定法を確立した。カンパチ血清及び体表粘液中のVgの周年変化を測定した結果から卵黄形成期を特定した。Vgの卵黄蛋白への分解過程及び胚発生に伴う卵黄蛋白の分解過程:(1)サクラマス卵巣からVg分解酵素の精製を行い,42kDaの蛋白を得た。この蛋白質は抗ヒトカテプシンD血清に反応した。(2)サケマス卵を用いて,発生に伴う卵黄蛋白の変化をSDS―PAGEにより観察した結果,発眼期以降にリボビテリン(Lv)H鎖の染色性の減少に伴い,新たに低分子の蛋白バンドが出現した。孵化以降これらのバンドは染色性を増し,浮上期以降にはH鎖は消失した。(3)Lv分解酵素を検索し,Pefabloc SCにより阻害されたことから,先の結果と併せVgの分子解裂にはカテプシンD様のアスパラギン酸プロテアーゼ,Lvの分解にはトリプシンまたはキモトリプシン様セリンプロテアーゼが関与することが示唆された。卵黄蛋白のポリペプタイドへの分解過程:マツカワの卵より2種のLvを精製し特異抗体を作製した。血清中に2種類のVgの存在が明らかとなり,Vgは卵に取り込まれると2種のLvと2種のβ'-component及びホスビチンに解裂されると推察され,その後最終成熟期を経ると1種のLvは部分分解し,他の卵黄蛋白はアミノ酸まで分解されることが示唆された。

Vg synthesis in cell culture lines: Vg synthesis in primary culture lines was modulated in male hepatocytes, Vg synthesis in female hepatocytes was confirmed. E2 is added to the growth and development of pendants, and E2 is added to the growth and development of pendants. In vitro vitellogenesis of oocytes: analysis of vitellogenesis in vitro culture systems of oocytes In culture, the addition of pituitary glycoprotein (SPG) resulted in the initiation of vitellogenesis in unreached oocytes after a short period of culture. The maturation of seafood fish Vg is accompanied by changes: Vg is refined from the E2-treated female fish serum of Kanpan Chi, Kejha Ta and Taitrafika, and the determination method is established. The age of vitellogenesis in serum and body surface mucus was determined. The decomposition process of Vg vitelloprotein and the development of embryo are accompanied by the decomposition process of Vg vitelloprotein:(1) The purification of Vg decomposing enzyme is carried out, and the 42kDa protein is obtained. The protein is anti-inflammatory. (2)The development of vitelloprotein was accompanied by the decrease of vitelloprotein staining in SDS-PAGE. Hatching to fall to the ground, the color is increased, floating to fall to the ground, the lock is disappeared. (3)Lv The decomposition enzyme is detected by Pefabloc SC, and the molecular cleavage of Vg is detected by Pefabloc SC. The decomposition enzyme is detected by Pefabloc SC, and the molecular cleavage enzyme is detected by Pefabloc SC. The decomposition process of vitelloprotein: two kinds of LV protein are purified and specific antibodies are produced. The presence of 2 species of Vg in serum was observed, 2 species of LV, 2 species of β'-component and 2 species of vitellin were detected, and 1 species of LV was partially decomposed during the final maturation stage, and other vitellin was decomposed by acid.