骨芽細胞におけるPTHrP産生とビタミンDによる調節

成骨细胞中 PTHrP 的产生及维生素 D 的调节

• 批准号: 08671203
• 负责人: 大薗 恵一
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671203/
• 关键词: ビタミンD; 副甲状腺関連蛋白; 骨芽細胞; 転写抑制; ビタミンD応答配列; 悪性腫瘍; 高カルシウム血症; プロモーター活性

ヒト骨肉腫由来骨芽細胞様株細胞Saos-2細胞より軟寒天培養法を用いて副甲状腺ホルモン関連蛋白(PTHrP)を高産生するクローンを6コ得た。このうち、安定してPTHrPを高産生するクローンをE5と名付け、実験を行い以下の結論を得た。1.細胞数を測定して増殖曲線を作製し、Saos-2細胞とE5細胞間に差のないことを認めた。2.培養上清中のPTHrPをIRMA法で測定し、E5細胞はSaos-2細胞より約4.6倍高濃度のPTHrPを産生していることを確認した。3.E5細胞においてPTHrP産生は、対数増殖期(培養10日まで)には増加し(2.4倍)、その後減少した(0.24倍)。4.PTHrPの産生は10-8M1,25(OH)2D3添加により、増加する傾向が見られ、14及び17日目において有意に増加した(1.9倍,3.2倍)。5.本細胞におけるPTH/PTHrP受容体の発現をRT-PCRにて確認した。6.10-8M1,25(OH)2D3添加により、ビタミンD応答配列(VDRE)を用いたレポーター活性が2.6倍に高められ、ビタミンD受容体(VDR)発現ベクターの導入により5.9倍に誘導された。Saos-2細胞では、それぞれ、4.7倍、5.9倍であった。7.ヒトPTHrP遺伝子プロモーター上のputative negative VDRE(GGGTGAggaaGGGTGT)の機能を検討したところ、Saos-2細胞において抑制反応は見られなかった。一般に、活性型ビタミンDはnegative VDREを介して、PTHrPの産生を抑制すると考えられ、実際、ラットにおいてPTHrP遺伝子のnegative VDREが報告されている。しかし、ラット胎児長管骨において、ビタミンDによりPTHrP分泌が上昇したとの報告もあり、ビタミンDとPTHrP産生についてはさらに検討する必要がある。

The osteoma is derived from bone bud cell line Saos-2 cells. The expression of parathyroid related protein (PTHrP) in soft cold culture was detected. The following conclusions are drawn from the above discussion. 1. Cell number determination and proliferation curve control, Saos-2 cells and E5 cells between the difference between the two. 2. PTHrP in culture supernatant was detected by IRMA method. E5 cells produced PTHrP at about 4.6-fold higher concentration than Saos-2 cells. 3. The production of PTHrP in E5 cells increased by 2.4 fold during the growth period (10 days) and decreased by 0.24 fold later. 4. The production of PTHrP was 10-8 M 1,25(OH)2D3. The tendency of PTHrP to increase was 1.9 times and 3.2 times higher than that of M1, 25 (OH) 2D 3. 5. The expression of PTH/PTHrP receptor was confirmed by RT-PCR. 6.10-8M1,25(OH)2D3 Add VDRE, VDRE, VDRE, Saos-2 cells,, 4.7 times, 5.9 times. 7. The function of PTHrP gene on putative negative VDRE(GGGTGAggaaGGGTGT) was investigated in Saos-2 cells. In general, the negative VDRE of PTHrP is reported in the active mode, and the negative VDRE of PTHrP is reported in the active mode. There are reports that PTHrP secretion has increased due to the fetal long tubular bone, and there is a need to discuss the relationship between VitaminD and PTHrP production.

项目成果

K.Ozono,M.Yamagata,C.Shimizu,T.Koda,I.Yanagihara,S.Nakajima: "AF-2 region is not critical for the vitamin D receptor to suppress the transcription via nVDRE in chick PTH and human PTHrP gene." Abstract of lst Cancer-Induced Bone Diseases. (in press).

K.Ozono,M.Yamagata,C.Shimizu,T.Koda,I.Yanagihara,S.Nakajima：“AF-2 区域对于维生素 D 受体通过 nVDRE 抑制小鸡 PTH 和人 PTHrP 基因中的转录并不重要

幸田徳二、柳原格、山形雅代、清水千佳、中島滋郎、大薗恵一: "ヒト骨肉腫由来細胞株(Saos-2 cell)における副甲状腺ホルモン関連蛋白産生の解析" 小児代謝性骨疾患研究会報告書. (in press).

Tokuji Koda、Itaru Yanagihara、Masayo Yamagata、Chika Shimizu、Shigeru Nakajima、Keiichi Ozono：“人骨肉瘤衍生细胞系（Saos-2细胞）中甲状旁腺激素相关蛋白产生的分析”小儿代谢性骨病研究组报告（in按）。