ビタミンD応答配列(VDRE)の解析 positive vs negative VDRE

维生素 D 反应元件 (VDRE) 阳性与阴性 VDRE 的分析

• 批准号: 09671089
• 负责人: 大薗 恵一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09671089/
• 关键词: ビタミンD応答配列; 遺伝子プロモーター; 1位水酸化酵素; 遺伝子発現抑制; ビタミンD代謝; ビタミンD受容体; 遺伝子クローニング; 24位水酸化酵素; 副甲状腺ホルモン; レポーター

ビタミンD応答配列(VDRE:vitaminn D response element)の機能を理解する上で、chick副甲状腺ホルモン遺伝子等でみられるDR3型のnVDRE(negative VDRE)が、正の応答性を示すVDREと構造が類似しているにもかかわらず応答が異なる機序を検討する必要がある。前年度は、DR3型nVDREのビタミンD応答性を検討したが、ビタミンD添加群は非添加群の85%程度の活性を示し、用いたnVDREの負の応答性が不十分であると判断されたので、今年度は、より負の応答性が明瞭な遺伝子プロモーターを得ることを目的として、ヒト1α位水酸化酵素(1αOHase)遺伝子プロモーターのクローニングを行った。BAC(bacterial artificial chromosome)system "Down to the Well BAC Human DNA Pools"(Genome SYstems Ins,)を用いて、既報告の塩基配列を利用してprimerを合成し、PCR screeningを行い、1αOHaseの上流を含んでいると思われるBAc cloneを決定した。1αOHase遺伝子を含む上流約3Kbpを切り出し、pGEM3zfにsubcloningした。その後、luciferaseをリポーターとするベクターに組込み、subcloningした1αOHase遺伝子5'上流域がプロモーター活性を持つことを確認した。COS細胞にビタミンD受容体(VDR)発現ベクターともに導入したが、1α位水酸化酵素(1αOHase)遺伝子プロモーターのビタミンDの応答性は認められなかった。ビタミンD応答性が細胞特異的である可能性があるので尿細管細胞を用いる必要がある。また、VDRの導入のみでプロモーター活性の低下が認められたので、1α位水酸化酵素(1αOHase)遺伝子プロモーター活性の負の制御が、リガンド非存在下でみられる可能性が考えられた。

VDRE:vitaminn D response element (VDRE) is a functional component of DR3 type, and it is necessary to discuss the mechanism of DR3 type VDRE (negative VDRE), positive VDRE and structure similarity. In the past year, DR3-type NVDRE has been tested for its activity, and the activity of DR3-type NVDRE has been tested to 85% of the activity of DR3-type NVDRE. In this year, the activity of DR3-type NVDRE has been tested to 85% of the activity of DR3-type NVDRE. BAC(bacterial artificial chromosome)system "Down to the Well BAC Human DNA Pools"(Genome SYstemsIns,) is used, reported base alignment is used, primer synthesis is used, PCR screening is used, 1αOHase upstream is used, BAc clone is determined. 1αOHase gene contains about 3Kbp upstream, pGEM3zf subcloning After that, Luciferase was identified as a subclone of 1αOHase in the upper part of the river. COS cell VDR receptor (VDR) develops a response to the introduction of 1 α-OHase. The possibility of cell specificity is necessary for the use of urine tubule cells The possibility of negative control of VDR activity by 1α-position hydroacidifying enzyme (1αOHase) in the absence of VDR was examined.

项目成果

Ozono K,et al: "AF-2 region is not critical for the vitamin D receptor to suppress the transcription via nVDRE in chick PTH and human PTHrP genes." Cancer-induced bone diseases(abstract). 30- (1997)

Ozono K 等人：“AF-2 区域对于维生素 D 受体通过 nVDRE 抑制小鸡 PTH 和人类 PTHrP 基因转录的作用并不重要。”

Nakajima S,et al.: "A 65 Kilodalton nuclear protein binds to the human vitamin D receptor : A bacterial expressed histidine tagged receptor study." Biochem Biophys Res Commun. 232. 806-809 (1997)

Nakajima S 等人：“65 Kilodalton 核蛋白与人类维生素 D 受体结合：一项细菌表达的组氨酸标记受体研究。”

Uchida M,et al.: "In vitro binding of vitamin D receptor occupied by 24R,25-dihydroxyvitamin D_3 to vitamin D responsive element of human osteocalcin gene." J.Steroid Biochem Mol Biol. 60. 181-187 (1997)

Uchida M 等人：“24R,25-二羟基维生素 D_3 占据的维生素 D 受体与人骨钙素基因的维生素 D 反应元件的体外结合。”

Okano T,Nakagawa K,Tsugawa N,Ozono K,et al.: "Singly dehydroxylated A-ring analogues of 19-nor-1α,25-dihydroxyvitamin D3 and 19-nor-22-oxa-1α,25-dihydroxyvitamin D3: novel vitamin D3 analogues with potent--" Biol Pharm Bull. 21. 1300-1305 (1998)

Okano T、Nakakawa K、Tsukawa N、Ozono K 等人：“19-nor-1α,25-二羟基维生素 D3 和 19-nor-22-oxa-1α,25-二羟基维生素 D3 的单脱羟基 A 环类似物：具有强效作用的新型维生素 D3 类似物——”Biol Pharm Bull. 21. 1300-1305 (1998)

Yamagata M,Nakajima S,Tokita A,…,…,…,Ozono K.: "Analysis of the stable levels of messenger RNA derived from different polymorphic alleles in the vitamin D receptor gene." J Bone Miner Metab. (in press).

Yamagata M、Nakajima S、Tokita A、…、…、…、Ozono K.：“维生素 D 受体基因中不同多态性等位基因的信使 RNA 的稳定水平分析（J Bone Miner Metab）。” 。