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口腔内連鎖球菌の産生する骨芽細胞障害因子の精製とその病原性に関する研究

口腔链球菌产生的成骨细胞损伤因子的纯化及其致病性研究

基本信息

批准号：
08672149
负责人：
佐藤研一
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672149/
关键词：
Streptococcus mitis 慢性下顎骨骨髄炎骨芽細胞 cytotoxic

项目摘要

慢性下顎骨骨髄炎の起因菌であるStreptococcus-mitis-JK09株の病原因子を検討したところ、菌体破砕物(以下、lysate)中にラット骨肉腫由来培養骨芽細胞C5.8Hの形態変化を引き起こし、細胞障害を起こす活性(以下、障害活性)が存在することを見いだし、この活性を担う物質(以下、TOX)の性状を検討すると共に、その精製を試みた。障害活性は60℃30分の加熱処理、及びトリプシン処理で失活することより、TOXは易熱性のタンパクであることがわかった。限外濾過膜の通過性から推定したTOXの分子量は100,000以上であった。粗製製標品(lysate)中のTOXは4℃においても容易に失活し、障害活性を安定に保つためには4mM以上の濃度のEDTAによって蛋白分解酵素を不活化することが重要であることがわかった。また、TOXは共存する他の蛋白質との凝集傾向が示唆されたため1M尿素存在下でその精製方法を検討したところ、硫酸アンモニウムによる塩析法、陰イオン交換樹脂(DEAE-Sephacel)、疎水性樹脂(Phenyl-Sepharose)、ハイドロキシアパタイトゲル、ゲル濾過樹脂によって効率的に共存蛋白と分離できることがわかり、これらの方法を組み合わせることでTOXが精製できると期待している。尚、ゲル濾過法により推定したTOX分子量は約150,000であった。C5.8H細胞はTOXの作用後約18時間で細胞の偏平化、萎縮が認められ、TOXがcytotoxicな作用を有していることが示唆された。口腔内より分離した別のS.mitis菌株について同様の障害活性を検討したところ、障害活性の認められない菌株が存在することより、TOXがこの症例にみる症状の発現に何らかの役割を担っていた可能性が示唆された。

The pathogenic factors of the Streptococcus-mitis-JK09 strain, which is the causative agent of chronic mandibular osteomyelitis, were investigated. It was found that the bacterial lysate (hereinafter, lysate) caused the morphological changes of cultured bone bud cells C5.8H and the existence of cell barrier activity (hereinafter, barrier activity). The properties of this activity-supporting substance (hereinafter, TOX) were discussed and refined together. Heat treatment at 60℃ for 30 min and heat treatment at 60 ℃ for 30 min. The permeability of the outer filtration membrane is estimated to be more than 100,000. TOX in the crude lysate is easily inactivated at 4℃, impairing activity, stabilizing, and inactivating protease at concentrations of EDTA above 4 mM. The aggregation tendency of TOX and other proteins in the presence of urea is shown by the purification method of TOX and TOX.(DEAE-Sephacel), Phenyl-Sepharose resin, Dextrin, Dextrin. The molecular weight of TOX is estimated to be about 150,000. About 18 days after TOX treatment, C5.8H cells became flat and atrophied, and TOX showed cytotoxic effects. The presence of S.mitis strains isolated in the oral cavity indicates the likelihood of their presence in the presence of symptoms.