樹状細胞のT細胞活性化能を応用した口腔癌に対する免疫遺伝子治療法の開発

利用树突状细胞的T细胞活化能力开发口腔癌的免疫基因疗法

• 批准号: 08672175
• 负责人: 山口 聰
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672175/
• 关键词: 免疫遺伝子治療; 樹状細胞; モノクローナル抗体

本研究ではGM-CSF産生腫瘍細胞を接種した担癌マウスの脾臓から樹状細胞を分離、培養する方法を開発し、それにより得られた樹状細胞はヒトの末梢血より分離したT細胞を活性化しうることが示された。さらに樹状細胞,T細胞、U937(ヒト単球 系細胞株)の3種類の細胞を共培養するとT細胞は強力に活性化されるという興味深い結果が得られた。そこでこの3種類の細胞を共培養した後にハムスターに免疫しモノクローナル抗体を樹立した。それらのなかからT細胞活性化を修飾するような抗体をスクリーニングし約50種類のモノクローナル抗体を得た。そして本期間中には12H6、28G5の2つの抗体に注目し解析をおこなった。2つの抗体ともに樹状細胞に強く結合するが、U937にはわずかに結合し、T細胞には結合しない。また、T細胞と樹状細胞、U937を共培養した時に生ずるT細胞の活性化を約50%に減少させた。次に抗原提示細胞に発現しておりT細胞活性化にすでに関与することが知られている分子であるICAM-1、LFA-3、CD80、CD86に対する結合を調べたが、2つの抗体ともにいずれの分子にも結合しなかった。他の細胞への結合を調べたところ、LCL(ヒトB細胞)、P388D1(マウスマクロファージ前駆細胞)には結合しなかったが、A20(マウスB細胞)には12H6、28G5ともに樹状細胞と同程度に強く結合した。A20を用いて免疫沈降をおこなったところ2つの抗体ともに約35Kdの分子を認識していることが分かった。現在、A20のcDNAライブラリーをパニングによりスクリーニングする方法とA20のレトロウイルスライブラリーを用いたセルソーテイングの2つのアプローチにより12H6、28G5が認識する分子のcDNAクローニングを進めている。

In this study, GM-CSF-producing tumor cells were inoculated into tumor cells, and dendritic cells were isolated and cultured. In addition, dendritic cells,T cells and U937(a single cell line) were co-cultured with three types of cells, and T cells were strongly activated. These three kinds of cells were co-cultured and then the immune system was established. About 50 kinds of antibodies were obtained from T cell activation modification. This period of time, 12H6, 28G5 and 2 antibodies were analyzed. 2. Dendritic cells bind strongly to antibodies, U937 binds strongly to T cells and U937 binds strongly to T cells. When T cells, dendritic cells and U937 were co-cultured, the activation of T cells was reduced by about 50%. The second antigen indicates that the cell is present and that the molecules involved in T cell activation are ICAM-1, LFA-3, CD80 and CD86. The second antigen indicates that the molecules involved in T cell activation are involved in antibody binding. In addition, the binding of P388D1 (LCL) and P388D2 (A20) to dendritic cells was strongly regulated by 12H6 and 28G5. A20 is used for immune sedimentation. The antibody is about 35Kd. Now, A20's cDNA sequence is divided into two groups: 12H6 and 28G5. The two groups are used to identify the cDNA sequence of the cDNA sequence.