レクチンの植物細胞外へのターゲティングによるインテグリテッド生産ブロセマの構築

通过将凝集素靶向植物细胞构建一体化生产 Brosema

• 批准号: 10145213
• 负责人: 海野 肇
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10145213/
• 关键词: レクチン; カルス; タバコ細胞; 分泌

大麦レクチンの全領域をコードする遺伝子断片、及び液胞ターゲティングシグナルであるCTPP領域を欠失した遺伝子断片をPCR法により増幅後、バイナリーベクター(pBI121)ヘクローニングしそれぞれpBI/BL,pBI/ΔCTPPと命名した.また、大麦レクチンのシグナルペプチド配列をコードする遺伝子領域をPCR法により増幅後、pBI121に含まれるGUSをコードする領域の上流へ挿入し、pBI/sp-GUSと命名した.それぞれの発現ベクターは大腸菌JM109で複製後、常法により精製しアグロバクテリウムを介しタバコ細胞へ導入した.選択培地を含むプレート当たり、それぞれ数十の形質転換体タバコカルス塊が得られた.それらのカルス塊を新たなプレートに移し、さらに2〜3週間培養後、液体培養を開始した.液体培養を開始してから約3週間後にタバコカルスを回収し、培養液上清、細胞の可溶性画分・不溶性画分にそれぞれ分け、免疫蛍光法によりレクチンの検出を試みた.選択培地で増殖したカルスであるにも関わらずほとんどのカルスはレクチンを産生していなかった.唯一、pBI/ΔCTPP由来のカルスからレクチン特異的フラグメントが細胞の可溶性画分に検出された.しかし、培養上清中へ分泌されたレクチンは極微量であった.現在までに実験手法の第一段階を確立したが、この方法を実用段階へ進めるためにはさらに多くの組換体カルスからタンパク質発現量の多い植物体を選択し、遺伝子工学的手法および培養工学的観点からタンパク質の分泌機構を解析すると共に、その最適化を図る必要がある.

The whole field of barley is divided into four parts: gene fragment, gene fragment and gene fragment. The whole field of barley is divided into three parts: gene fragment, gene fragment and gene fragment. pBI/sp-GUS was named after PCR amplification in the sub-domain of pBI121, which contained GUS. After replication of E. coli JM109, purification of E. coli JM109 was carried out by normal method. The selection process includes the selection process, and the selection process. After 2 to 3 weeks of culture, liquid culture begins. About 3 weeks after the start of liquid culture, the culture medium supernatant, soluble fraction and insoluble fraction of cells were recovered, and the immunofluorescence method was used to detect the cells. The election was held at the end of the year. Unique, pBI/ΔCTPP origin and cell solubility profile detection. The amount of fine dust secreted in the supernatant of the culture medium was determined. The first stage of the method is established, and the method is used to advance the stage of the method. The method of genetic engineering is necessary to select and optimize the plant body of many kinds of components, to analyze the secretion mechanism of many kinds of components.

项目成果

Yasunori,Tanji et al: "Aclion of cloned T4 phage gene e and t" Phage Biology Heeling. 46 (1998)

Yasunori、Tanji 等人：“克隆 T4 噬菌体基因 e 和 t 的 Aclion”噬菌体生物学 Heeling。