腫瘍細胞走化性促進因子、PD-Iの作用機構の解明およびがんの質的診断への応用

阐明肿瘤细胞趋化促进因子PD-I的作用机制及其在癌症定性诊断中的应用

• 批准号: 10153240
• 负责人: 佐野 公彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10153240/
• 关键词: ホスホジエステーゼI; グリオーマ; エクトエンザイム; PC-1; PONP

PD-Iβ cDNAをプローブとしてヒトBAC DNAライブラリーをスクリーニングし、PD-Iβ遺伝子の全長を含むクローンを得た。PD-Iβ遺伝子は約60kbの大きさで、25のイントロンと26のエクソンからなっていた。また、各機能ドメイン(細胞質ドメイン、膜貫通ドメイン、ソマトメジンB領域、酵素活性領域、EF handドメイン)はそれぞれ一つのエクソンにコードされていた。5'非翻訳領域にはTATA boxを欠いていたが、複数のCCAAT結合蛋白質の結合配列が認められた。ラット9Lグリオーマ細胞を用いたルシフェラーゼ・アッセイの結果、PD-Iβ遺伝子の転写には-245bpまでの領域が必要であった。また、部位特異的変異導入法によってPDIβの酵素活性にはEF hand配列が必須である事を明らかにした。三つのPD-Iファミリー蛋白質の構造は、細胞外ドメインは極めて良く保存されているが、細胞内ドメインおよび膜貫通領域には全く類似性が認められない。そして、我々のこれ迄の解析によって、肝細胞においてはPC-1はapical surfaceに、PDIβは細胞内小器官およびbasolateral surfaceに局在する事が明らかとなっている。そこで本研究では不死化ヒト軟骨細胞であるTC28細胞にPC-1およびPD-Iβを強制発現して細胞内/外のピロリン酸を測定して、これらの分子の細胞内輸送と作用部位を解析した。PC-1およびPD-Iβ発現細胞はともに細胞内および細胞外のピロリン酸濃度を上昇させた。これらの細胞にゴルジ体から小胞体への輸送を阻害するbrefeldinAを作用させるとPC-1発現細胞のピロリン酸濃度は著明に低下したが、PD-Iβ発現細胞には影響を与えなかった。

PD-Iβ cDNA is a fragment of BAC DNA, and the full length of PD-Iβ cDNA is obtained. PD-I beta gene is about 60kb in size, 25kb in length and 26kb in length. Each functional element (cytoplasmic element, membrane penetration element, soft element B field, enzyme activity field, EF hand element) is composed of a set of soft elements. 5'non-inverted domain TATA box is missing, multiple CCAAT-binding proteins are identified. 9L The site-specific enzyme introduction method is necessary for EF hand alignment. The structure of PD-I protein is very similar to that of extracellular protein, which is very well preserved, and intracellular protein and membrane-penetrating protein. In addition to the above, the analysis of the liver cells, the PC-1 apical surface, the PDI beta intracellular small organs and the basal surface are also discussed. In this study, we determined the intracellular and extracellular transport of PC-1 and PD-Iβ in TC28 chondrocytes. PC-1 and PD-Iβ-producing cells were found to have increased intracellular and extracellular acid concentrations. Brefeldin A is an inhibitor of cellular transport and the concentration of Brefeldin A in PC-1 cells is lower than that in PD-I cells.

项目成果

Johnson,K.: "Differential mechanisms of pp : production by plasma cell membrane glycoprotein-1 (PC-1) and B10 in chondrocytes" Arthritis Rheumatism. (in press).

Johnson,K.：“pp 的不同机制：软骨细胞中浆细胞膜糖蛋白 1 (PC-1) 和 B10 的产生”关节炎风湿病。