シナプス前末端内Ca^<2+>動態と伝達物質放出の同時測定:可塑性機構メカニズムの解明

同时测量突触前末梢内 Ca^<2+> 动力学和递质释放：阐明可塑性机制

• 批准号: 10156216
• 负责人: 鈴木 直哉
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10156216/
• 关键词: シナプス前末端; カルシウム感受性蛍光色素; 共焦点顕微鏡; シナプス; 短期可塑性; 神経筋接合部; カルシウムイオン

1. 高速共焦点顕微鏡によるCa^<2+>ドメインの可視化カエル神経筋シナプス前末端において2ミリ秒の時間分解能での高速のCa^<2+>イメージングに成功し、電位依存性Ca^<2+>チャネルから流入したCa^<2+>により形成される空間的にヘテロなCa^<2+>濃度分布(Ca^<2+>ドメイン)を可視化した。Ca^<2+>ドメインは神経刺激後5〜15ミリ秒の時間に存在し、25ミリ秒程度たつとほぼ一様になることが判った。2. 前末端内残存Ca^<2+>と短期可塑性(促通)との関係Ca^<2+>キレート剤であるBAPTAやEGTAを前末端に負荷した時の短期可塑性の変化を電気生理学的に、また、その同じシナプス末端内Ca^<2+>動態の変化を測光装置により測定した。結果は以下の様になった。BAPTAが少量でも負荷されると速い促通が抑制され負荷量が増えるとほとんど消失した。そして多量に負荷されると遅い促通も減少した。これに対して、EGTAは速い促通への抑制効果がBAPTAに比べて非常に弱く、多量に負荷しても速い促通は残った。しかし、遅い促通はよく抑制した。100Hz10回刺激後の末端内Ca^<2+>濃度の減衰は、3つの指数関数(減衰時定数40ミリ秒程度、150〜200ミリ秒、700〜800ミリ秒)の和プラス定数でよく近似された。これに、BAPTAを負荷すると、速いCa^<2+>減衰は消失し、ほぼ減衰時定数1〜2秒程の成分のみになった。また、EGTAを負荷した時には大きさは小さくなるものの速いCa^<2+>減衰成分が残り、あとは減衰時定数が3〜4秒の非常に小さな成分になった。これらの結果から、速い促通は古典的残存Ca^<2+>で説明可能であるが、遅い促通の機構は、残存Ca^<2+>をリアルタイムでモニターする高親和性Ca^<2+>センサーではなく、残存Ca^<2+>を間接的に反映するような遅いキネティクスを持ったものであると考えられる。

1. High-speed total focus 顕 micromirror に よ る Ca ^ 2 + > < ド メ イ ン の visualization カ エ ル god 経 reinforcement シ ナ プ ス before end に お い て 2 ミ の リ seconds can decompose で の high-speed の Ca ^ 2 + > < イ メ ー ジ ン グ に successful し, potential dependency Ca ^ 2 + > < チ ャ ネ ル か ら inflows し た Ca ^ 2 + > < に よ り form さ れ る space に ヘ テ ロ Youdaoplaceholder0 Ca^<2+> concentration distribution (Ca^<2+>ドメ た)を visualization た た. Ca ^ 2 + > < ド メ イ ン は god 経 stimulus after 5 ~ 15 ミ の リ seconds に し, 25 ミ リ second degree た つ と ほ ぼ a others に な る こ と が convicted っ た. 2. Front end Ca residual ^ < 2 + > と short-term plasticity (promote) と の masato is Ca ^ < 2 + > キ レ ー ト tonic で あ る BAPTA や EGTA を before end し に load when た の short-term plasticity の - を electric 気 physiological に, ま た, そ の with じ シ ナ プ ス end within Ca ^ < 2 + > dynamic の variations change を metering device に よ り determination し た. The result is as follows になった. BAPTAが a small amount of で <s:1> load されると rapid が promotion が inhibition され load が increase えるとほとん <e:1> disappearance た た Youdaoplaceholder0 て て a large に load されると遅 そ promotes the reduction of <s:1> た. こ れ に し seaborne て, EGTA は speed い promote tong へ の inhibition of unseen fruit が BAPTA に than べ て very weak に く, more quantity に load し て も speed い promote tong は residual っ た. <s:1>, 遅 遅 promote よく, よく inhibit た. Within の end after 100 hz10 back to stimulate the Ca ^ > < 2 + concentration の damping は, 3 つ masato の index number (when the damping constant 40 ミ リ second degree, 150 ~ 200 ミ リ seconds, 700 ~ 800 ミ リ seconds) の and プ ラ ス destiny で よ く approximate さ れ た. こ れ に, BAPTA を load す る と, speed い Ca ^ 2 + > < damping は disappear し, ほ ぼ damping number 1 ~ 2 seconds when cheng の composition の み に な っ た. When ま た, EGTA を load し た に は big き さ は small さ く な る も の の speed い Ca ^ 2 + > < damping component が り residue, あ と は when the damping constant が 3 ~ 4 seconds の very small に さ な composition に な っ た. こ れ ら の results か ら, promoting the remnants of classical は speed い Ca ^ 2 + > < で instructions may で あ る が, 遅 い promote tong の は, residual Ca ^ 2 + < > を リ ア ル タ イ ム で モ ニ タ ー す る high-affinity Ca ^ 2 + > < セ ン サ ー で は な く, residual Ca ^ 2 + > < を indirect に reflect す る よ う な 遅 い キ ネ テ ィ ク ス を っ Youdaoplaceholder0 た であると であると take えられる.

项目成果

Kiyoshi Ohnuma: "Cooperative Ca^<2+> removal from presynaptic terminals of the spiny lobster neuromscular junction" Biophys.J.76・4. 印刷中 (1999)

Kiyoshi Ohnuma：“从大龙虾神经肌肉接头的突触前末端协同去除 Ca^<2+>”Biophys.J.76・4 出版中（1999 年）。

Kazuhiko Narita: "A Ca^<2+>-induced Ca^<2+> release mechanism involved in asynchronous exocytosis at frog motor nerve terminals" J.Gen.Physiol.112・11. 593-609 (1998)

Kazuhiko Narita：“青蛙运动神经末梢异步胞吐作用中涉及的 Ca^<2+> 诱导的 Ca^<2+> 释放机制”J.Gen.Physiol.112・11（1998）。

木島 博正: "シナプス前神経末端におけるカルシウムイオン動態" CLINICAL CALCIUM. 8・2. 14-23 (1998)

Hiromasa Kijima：“突触前神经末梢的钙离子动力学”CLINICAL CALCIUM 8・2（1998）。