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動脈硬化の発症病態に関わるHSPG・Ryudocanの機能解析

HSPG/Ryudocan参与动脉硬化发病机制的功能分析

基本信息

批准号：
10177211
负责人：
小嶋哲人
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、血管内皮ヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG:Ryudocan)のもつ組織修復、動脈硬化における機能解析を行なう目的に遺伝子組換え操作を用いたRyudocanノックアウトマウスの作製とともに、血管傷害マーカーとしてのRyudocan血中濃度測定法の開発を検討した。マウスRyudocan geneの第2エクソンをターゲットにポジティブ・ネガティブセレクション用ターゲティングベクターを作製し、エレクトロポレーションにてES細胞(D3細胞)に導入、G-418入りES培地にて選択培養してサザン解析にて相同組換え体を単離・同定した。この相同組換え体をC57BL/6Jマウスの胚盤胞に注入して仮親の子宮に移植し、生まれたキメラマウスをC57BL/6Jマウスと交配した。PCRおよびサザン解析にて変異アレルの伝搬を調べへテロ変異マウスの雄雌を交配した結果、ホモ体が約1/4に生まれ、Ryudocanの欠失が発生ならびに生殖能には大きな異常を及ぼさないことが明らかとなった。これは、Ryudocanの欠失が他のHSPG発現等により機能的代償を受けている可能性を示唆するが、今後さらに詳細な表現型解析が必要と思われた。一方、抗Ryudocan特異抗体を用いたRyudocan測定法開発したところ、MBP-Ryudを標準物質にして5.0〜0.078ng/mlの濃度で測定可能で、正常人の血漿中濃度は測定感度以下であった。本法を用いて急性心筋梗塞発症患者の血漿中のRyudocan濃度を経時的に測定したところ、全例において心筋梗塞発症後2〜3週間目に最高値を示した。この時期は心筋梗塞後の組織修復期であり、Ryudocanが血管新生、線維芽細胞増殖などにより組織修復に関わっていることが示唆された。今後、動脈硬化などの血管傷害患者でのRyudocan 血中レベルを検討して行く予定である。

I 々は, vascular endothelial sulfate sulfate プロテオグリカン (HSPG: Ryudocan) のもつ tissue repair, arteriosclerosis における functional analysis を行なうpurpose に伝subgroup Change operation and use いたRyudocanノックアウトマウスのとともに、blood The tube is damaged by the Ryudocan blood concentration measurement method. MASUSRyudocan geneのNo.2エクソンをターゲットにポジティブ・ネガティブセレクション is made with ターゲティングベクターを, エレクトロポレーThe ES cells (D3 cells) were introduced, G-418 was introduced into the ES culture, the cells were selected and cultured, and the cells were analyzed and the same groups were exchanged and isolated and determined.このSame group replacement body をC57BL/6Jマウスのblastoderm cells injected into して仮kinshinzi Miyako's transplantation, birth and birth are the same. PCR およびサザン analysis にて変different アレルの伝movable べへテロ変different マウスの male and female を mating した results, ホモ体が about 1/ 4に生まれ, Ryudocanの无码が発生ならびにproductive energyには大きなAbnormalを and ぼさないことが明らかとなった.これは, Ryudocan's owed loss, his HSPG's appearance, etc. The compensation function of the HSPG is now possible, and the future detailed phenotypic analysis is necessary and necessary. On the one hand, anti-Ryudocan specific antibody をいたRyudocan assay method opened 発したところ, MBP-Ryudoを standard It is possible to measure the substance at a concentration of 5.0~0.078ng/ml, and the concentration in normal human plasma is below the measurement sensitivity. This method is used to measure the concentration of Ryudocan in the plasma of patients with acute myocardial infarction at the time of diagnosis. In all cases, the highest value was measured 2 to 3 weeks after myocardial infarction. The period of tissue repair after myocardial infarction, Ryudocan, angiogenesis, and proliferation of thread-derived germ cells, tissue repair, and tissue repair. From now on, patients with arteriosclerosis and blood vessel injuries will be treated with Ryudocan.