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シアリダーゼ遺伝子による細胞リモデリングとその臨床応用

唾液酸酶基因的细胞重塑及其临床应用

基本信息

批准号：
10178101
负责人：
斎藤誠一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

先に、ウシ脳のシナプトソーム膜に局在するシアリダーゼのcDNAクローニングに成功し、一次構造を明かにした。このたび、COS細胞での発現実験によって、このcDNAはガングリオシドにほぼ特異的に作用し、N-末端が細胞外を向いている非典型膜タンパクをコードしていることがわかった。このシアリダーゼに高いホモロジーを有する酸素がヒトやマウスにも存在することがわかったので、PCRやハイブリダイゼーション法によって、ヒトおよびマウス酸素遺伝子のクローニングを行った。これらの一次構造はそれぞれウシ酵素の83%および78%相同性を示し、予想される高次構造も類似していた。ヒトシアリダーゼcDNAを用いて、各組織の転写レベルを調べると、筋・神経組織で高く、消化器系組織では非常に低いことがわかった。これらの結果を基にがん組織における発現状態を調べたところ、消化器がん組織、とくに大腸がんで著しく高発現していることが明らかになった。しかし、がん転移能との相関性は得られなかった。また、マウス酵素cDNAをプローブとして、神経芽腫細胞Neuro2aの分化時における本酵素の役割を観察すると、神経突起形成につれて転写および活性両レベルでの亢進が認められた。以上のような発現の変化の機構や意識の解明をめざして、ゲノムDNAの検索や細胞への導入実験、トランスジェニックマウスの作成を行い、機能の実体を追及中である。今後は、リソゾーム膜性シアリダーゼなど、GM2を水解するガングリオシド・シアリダーゼのクローニングも完成させ、主要なシアリダーゼcDNAをすべて駆使することによって、生理的脱シアリル化の全貌を把握し、がんや脳神経・筋疾患などの病態機構の解明をめざしたい。

First, the structure of the cDNA library is described in detail. The expression of this cDNA in COS cells is characterized by its specific function, N-terminal orientation, and extracellular orientation. This high-tech technology has made it possible for high-tech companies to exist in both the market and the market. PCR and HIBRILIDAI technology are used to develop high-tech and high-tech products. 83% and 78% identity of these enzymes were observed in the primary structure and the secondary structure was expected to be similar. In addition, the expression of cDNA in various tissues is also higher in muscle and digestive tissues. The result is that the digestive organs are organized and the large intestine is developed. The relationship between the two can be reversed. The enzyme cDNA expression and activation during differentiation of neuroblastoma cell Neuro2a are detected and recognized during neurogenesis. The mechanism of the above development, the understanding of consciousness, the detection of DNA, the introduction of cell DNA, the creation of cell DNA, and the implementation of function are all in progress. In the future, we will complete the research on membrane degradation and GM2 hydrolysis, and understand the whole picture of physiological degradation and the pathological mechanism of neuromuscular diseases.