ホスホリパーゼA2ファミリーのメンバーの新しい機能

磷脂酶A2家族成员的新功能

• 批准号: 10212205
• 负责人: 東城 博雅
• 金额: $ 18.82万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (B)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10212205/
• 关键词: ホスホリパーゼA2; リパーゼ; ホスホリパーゼB; リン脂質; 質量分析; HPLC; ホスファチジン酸; リゾビスホスファチジン酸; 精巣; リゾホスファチジン酸

ホスホリパーゼA2(PLA2)の受精への関与は以前より指摘されていたが、その実体はまったく不明のままである。精子に存在し高いCa^<2+>非依存性PLA2比活性を発揮するホスホリパーゼB/リパーゼ(PLB/LIP)のヒト精子における局在部位とアクロゾーム反応における役割を、インホームドコンセントの得られた健常者から採取した運動精子を用いて検討した。その結果、PLB/LIPは精巣で生殖細胞特異的に発現し、ヒト精子先体反応のメディエータのひとつとして働くことがわかった。本酵素のin vivoにおける役割をさらに詳しく解析するために、PLB/LIPのノックアウトマウスの作成を進めている。精巣には、またホスファチジン酸(PA)特異的PLA2(PA-PLA2)が存在する。本酵素はリパーゼの一つのサブファミリーに属する、新しいタイプのPLA2で、至適pH5.5付近でPAと同程度の比活性でエンドゾーム特異的脂質リゾビスホスファチジン酸(LBPA)も分解することを明らかにしてきた。本酵素は、モノアシルグリセロールも分解し、PLB/LIPと同様にリパーゼ活性を持つPLA2である。このように、多様な反応を触媒する酵素が生体内でどの基質に作用しているかを明らかにすることが必要である。これを解析するために、PA-PLA2のLBPA活性測定に有効に利用した高感度HPLC-ESI質量分析技術をさらに発展させて自動化脂質組成一斉分析装置のプロトタイプを作製し特許出願した。現在、この装置を用いてPLB/LIPとPA-PLA2のin vivoでの基質を検索している。また本装置は、脂質のメタボローム解析に応用可能であり、脂質代謝異常症マウスの病因解析を進めている。2.IB群PLA2の肺における機能を追求するために、マウス肺、胃、膵臓からIB群PLA2を精製してその性質を詳しく検討した。特異抗体を調製し、IB群PLA2の定量系として酵素抗体法を作成した。肺移植後の拒絶反応とIB群PLA2の関連を調べるためIB群PLA2ノックアウトマウスを用いて急性拒絶反応モデルを作成し、IB群PLA2の動態を検討中である。

The fertilization of A2(PLA2) is unknown. Spermatozoa exist in high Ca^<2+>-independent PLA2 specific activity, and the development of high Ca ^<2 +>-independent PLA 2 specific activity in high Ca ^<2 +>-independent PLA 2 + activity. PLB/LIP is a germ cell specific gene that can be used to detect sperm precursors. The enzyme in vivo activity analysis, PLB/LIP and its preparation The presence of PA-PLA 2(PA-PLA2), which is specific for PA, is also observed. This enzyme is a novel enzyme that catalyzes the degradation of LBPA at pH 5.5 and at the same level of specific activity as PLA2. This enzyme maintains the activity of PLA2 in response to the same reaction between PLB and LIP. This is a necessary step for the development of enzymes in vivo. The analysis of PA-PLA-2 and LBPA activity was carried out using the highly sensitive HPLC-ESI mass analysis technique and the development of an automated lipid composition analyzer. Now, the device uses PLB/LIP and PA-PLA2 in vivo to explore the substrate. This device can be used to analyze the causes of lipid metabolism disorders. 2. The functions of IB group PLA 2 are discussed in detail. Specific antibody modulation, IB group PLA2 quantification system and enzyme antibody method were established. The relationship between rejection response and IB group PLA2 after lung transplantation is modulated. The relationship between IB group PLA2 and acute rejection response is established. The dynamics of IB group PLA2 is discussed.

项目成果

東城博雅: "新しいリパーゼファミリーに属するホスホリパーゼB/リパーゼ"蛋白質核酸酵素. 44. 1032-1037 (1999)

Hiromasa Tojo：“属于新脂肪酶家族的磷脂酶 B/脂肪酶”蛋白质核酸酶。 44. 1032-1037 (1999)

Ting Lu: "Identification of Essential Residues for Catalysis of Rat Intestinal Phospholipase B/Lipase"Biochemistry. (印刷中).

陆挺：“大鼠肠磷脂酶B/脂肪酶催化必需残留物的鉴定”生物化学（出版中）。

Tojo, H.: "Purification and characterization of a catalytic domain of rat intestinal phospholipase B/lipase associated with brush border membranes" J.Biol.Chem.273. 2214-2221 (1998)

Tojo, H.：“与刷状缘膜相关的大鼠肠磷脂酶 B/脂肪酶催化结构域的纯化和表征”J.Biol.Chem.273。

Nakajima T.: "Phospholipase A2-mediated superoxide production of murine peritoneal macrophages induced by chrysotile stimulation"Int. J. Biochem. Cell Biol.. (印刷中). (2000)

Nakajima T.：“温石棉刺激诱导的磷脂酶 A2 介导的小鼠腹膜巨噬细胞的超氧化物产生”Int. Biochem.（出版中）。

Umwzawa,M.: "High-linoleate and high-a-linolenate diets affect learning ability an d natural behavior in SAMR1 mice" J.Nutr.129. 431-437 (1999)

Umwzawa,M.：“高亚油酸和高α-亚麻酸饮食影响 SAMR1 小鼠的学习能力和自然行为”J.Nutr.129。