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アストロサイト由来の自己反応性T細胞抑制因子の解明と遺伝子クローニング

星形胶质细胞来源的自身反应性 T 细胞抑制因子的阐明和基因克隆

基本信息

批准号：
10670589
负责人：
原英夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度では、アストロサイト由来の自己反応性T細胞抑制因子を解明し、その遺伝子をクローニングした.マウス由来のアストロサイト細胞株(G26-24)を培養し、IFN-γで処理したアストロサイトの1st strand cDNAより、未処理のアストロサイトのmRNAをsubtractionし、一本鎖のsubtracted cDNAライブラリーを作成した.これをプローブとして先に作成しておいたIFN-γで処理したアストロサイト由来のcDNAファージライブラリーをスクリーニングした.その結果、IFN-γで処理したアストロサイトに特異的に発現しているcDNA、約100クローンが得られた.100個のcDNAクローンを全てシークエンスし解析した.各クローンのhomology検索をNIHのgene databaseを用いて行ったところ、既知のクローンは、47クローンで、heat shock proteinやMHC class Iなどがあった.一部homologyが認められたクローンは7個で、espinなどの遺伝子と50-100塩基の範囲でhomologyが認められたが、残りのシークエンスは未知であった.全く未知のクローンは46クローンであった.未知のcDNAクローンを動物細胞発現ベクターに組み込み、CHO cell lineへ遺伝子導入し、蛋白を発現させた.一方で、SJL/JマウスにMBPを免疫し、そのリンパ節・脾細胞からリンパ球を分離し、MBP反応性T細胞株を作成した.このMBP反応性T細胞を先程の遺伝子導入したCHO cell lineの上で共培養し、どの遺伝子を導入したCHO cell lineにおいてT細胞にapoptosisが誘導されるか解析した.数個のクローンにおいて、T細胞のapoptosisの誘導が認められた.

This year, the origin of anti-T-cell inhibitory factors in human beings is unknown, and the origin of anti-T-cell inhibitory factors is unknown. The cell line (G26-24) was cultured, IFN-γ-treated, untreated, and cDNA subtracted from the mRNA of the cell line. The first step in the development of IFN-γ is to increase the production of IFN-γ by increasing the production of IFN-γ. As a result, IFN-γ treatment resulted in the discovery of specific cDNAs. About 100 cDNAs were identified. 100 cDNAs were analyzed. The homology of each gene can be searched by NIH gene database. The gene database can be used to search the gene database. The gene database can be used to search the gene database. The gene database can be used to search the gene database. The gene database can be used to search the gene database. A part of the homology 7 All unknown Unknown cDNA fragments are found in animal cells, CHO cell lines, gene introductions, protein discovery. A MBP resistant T cell line was isolated from spleen cells. The MBP resistant T cells were introduced into CHO cell lines prior to co-culture, and the MBP resistant T cells were introduced into CHO cell lines prior to induction of apoptosis. A number of T cell apoptosis induced by apoptosis.