各種微量ホルモンの時間分解蛍光免疫測定法の開発と魚類への応用

多种微量激素时间分辨荧光免疫分析方法的建立及其在鱼类中的应用

• 批准号: 10876042
• 负责人: 山田 英明
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10876042/
• 关键词: TR-F1A; DELF1A; メラトニン; GnRH; TR-FIA; DELFIA; ステロイド; 172-ヒドロキシプロゲステロン; DHP; 成長ホルモン; ハプテン; 11-ケトテストステロン; エストラジオール-17β; コルチゾル; プロゲステロン; テストステロン

本年度(平成12年)は、低分子ペプチドホルモンのサケ生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン(sGnRH)と神経伝達物質であるメラトニンの測定系開発を行った。両ホルモンともに、魚類の生殖腺発達や各種行動に関与していると考えられている重要なホルモンである。サケGnRHのN末端アミノ基にスペーサーを介してビオチンを導入し、これを標識抗原とした。サケGnRHに対する抗体をプレートウエルに固相化し、この抗体に対するビオチン標識抗原と測定試料の競合反応を起こさせた。固相面に形成されるビオチン標識抗原-抗体結合物を、ユーロピウム標識したストレプロアビジンで検出し、標準曲線および試料の測定値を求めた。開発された測定系は、高感度(ED=0.13ng/ml)で、その測定範囲は比較的広範囲(24pg/ml〜12.5ng/ml)であった。測定にかかわる各種項目(反応時間、反応温度、測定内・測定間変動係数)なども、おおむね以前に報告されている放射性免疫測定法とほぼ同様の結果を得た。現在、同じ方法を用いて、トリGnRH-IIとタイGnRH測定系の開発を行っている。メラトニンの測定系には、牛血清アルブミン(BSA)と結合させたメラトニン-BSA-コンジュゲートをプレートウエルに固相化する抗原固相化法を用いた。この測定系の感度は放射免疫測定法と同等で、他の測定系要因もほぼ同じであった。ニジマス受精卵を用いた実験では、明暗環境下での胚体における明瞭なメラトニン量変化を捉えることができ、その実用性が示された。同方法を用いたセロトニン測定系の開発を行っているところである。

This year (Heisei 12), the measurement system of low molecular weight substances such as gonadal stimulation (GnRH) and neurotransmitter substances was developed. The gonads of fish are related to all kinds of actions. N-terminal GnRH The antibody is immobilized, and the antibody is labeled and the assay is started. The antigen-antibody conjugate is identified by the solid phase surface, and the standard curve is determined by the detection of the antigen-antibody conjugate The assay was developed with high sensitivity (ED=0.13ng/ml), and the assay range was comparable (24pg/ml ~ 12.5ng/ml). Various items (reaction time, reaction temperature, coefficient of variation between measurements) were measured and the results of radioimmunoassay were obtained. Now, the same method is used to develop GnRH-II assay system. The method of antigen solidification was used for the determination of serum albumin (BSA) and bovine serum albumin (BSA). The sensitivity of the assay is the same as that of the radioimmunoassay. The embryo is used in light and dark environment. The embryo is used in light and dark environment The same method was used to determine the development of the system.

项目成果

Chiba et al.: "Development and differentiation of gonadotropin hormone-releasing hormone nearonal systems and testes in the Japanese eel(Anguilla japonica)" Gen.Comp.Endocrinol.(In press).

Chiba 等人：“日本鳗鱼（Anguilla japonica）促性腺激素释放激素近肾系统和睾丸的发育和分化”Gen.Comp.Endocrinol.（正在出版）。

Amano et al.: "Effects of photoperiod on salmon GuRHmRNA levels in brain of castrated underyearling precocious male masu salmon."Gen. Comp. Endocrinol. 115. 70-75 (1999)

Amano 等人：“光周期对去势幼鱼早熟雄性马苏鲑鱼大脑中鲑鱼 GuRHmRNA 水平的影响”。

Amano et al.: "Two differing salmon GnRH precursor nRNAs are co-expressed in the brain of sockeye salmon (Oncorhynchus nerlca)" Cell Tiss.Res.292(2). 267-273 (1998)

Amano 等人：“两种不同的鲑鱼 GnRH 前体 nRNA 在红鲑 (Oncorhynchus nerlca) 的大脑中共表达”Cell Tiss.Res.292(2)。

Amano et al.: "Ontogenic development of salmon GnRH and chicken GnRH-II systems in the brain of masu salmon" Cell Tiss.Res.293(3). 427-434 (1998)

Amano 等人：“马苏鲑鱼大脑中鲑鱼 GnRH 和鸡 GnRH-II 系统的个体发育”Cell Tiss.Res.293(3)。