尿素サイクル酵素の組織化(channeling)に関する蛋白質の発見を目指して

旨在发现与尿素循环酶通道相关的蛋白质

• 批准号: 10877020
• 负责人: 佐伯 武頼
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877020/
• 关键词: 尿素サイクル; 組織化; チャネリング; シトルリン血症; シトリン; argininosuccinate synthetase; Urea cycle; channeling; citrullinemia; yeast two hybrid

細胞外から投与した尿素サイクルの中間体よりも細胞内に存在する中間体が優先的に使用されることから、尿素サイクル酵素は組織化されており、基質が所謂channelingによって効率よく利用されているとされている。その証拠を得、関与するタンパク質を得ることを本研究の目的とした。この2年間に、尿素サイクル酵素であるargininosuccinate synthetase(ASS)蛋白質の肝臓特異的減少を伴う疾患である成人発症II型シトルリン血症の病因遺伝子が何らかの役割を果たす可能性を考え、homozygosity mappingとpositional cloningによって病因遺伝子の同定を試み、mitochondria局在のcitrinと名付けたタンパク質をコードする遺伝子に変異を発見した。CitrinはGEPとのfusion proteinとして細胞に発現させ、その細胞内局在がミトコンドリアにあることを確認した。また、抗体を用いた実験から、ASSとcitrinはいずれも肝細胞に局在することを確認した。現在直接相互作用するタンパク質の検索をyeast two hybird解析法で解析しているが、まだ適切な候補者を見い出し得ていない。また、ASSと次のステップを触媒する酵素であるargininosuccinate lyase(ASL)の間にはyeast two hybird system及び表面プラズモン共鳴装置でも直接の相互作用を発見できなかった。Citrin欠損によってASSが減少することからcitrinは何らかの機構でASSの安定性に関与することは明らかで、本新規タンパク質の機能を明らかにすることによって尿素サイクルの組織化の実体が明らかになるものと考える。

Extracellular and intracellular intermediates are used preferentially, urea enzymes are organized and substrates are used in so-called channeling. The purpose of this study is to investigate the relationship between the two. During the past two years, liver specific reductions in the enzyme argininate synthase (ASS) protein associated with disease have been identified in adults with type II diabetes mellitus, in homozygosity mapping, in positional cloning, in identification of etiological genes, and in mitochondria. Citrin's fusion protein is found in cells, and its intracellular structure is confirmed. The antibody was used to identify the liver cells. Now the direct interaction between the two hybird analysis method, the analysis of the two hybird analysis method, the analysis of the two hybird analysis method, the analysis of the two hybird analysis method, the analysis of the two hybird analysis method. The direct interaction between the enzyme and the secondary catalyst, the argininate lyase (ASL), and the two hybird system and the surface resonance device was observed. Citrin loss reduction, citrin organization, ASS stability, citrin organization, citrin organization

项目成果

小林圭子、佐伯武頼: "シトルリン血症"臨床検査. 43(7). 798-805 (1999)

Keiko Kobayashi，Takeyori Saeki：“瓜氨酸血症”临床检查 43(7) (1999)。

Keiko Kobayashi et al.: "The gene mutated in adult-onset type II citrullinaemia encodes a putative mitochondrial carrier protein"Nature Genetics. 22(2). 159-163 (1999)

Keiko Kobayashi 等人：“成人发病的 II 型瓜氨酸血症中突变的基因编码一种假定的线粒体载体蛋白”《Nature Genetics》。

Yotsumoto S: "A novel point mutation of the EDA gene in a Japanese family with anhidrotic ectodermal dysplasia." J.Invest.Dermatol.111. 1246-1247 (1998)

Yotsumoto S：“一个患有无汗性外胚层发育不良的日本家族的 EDA 基因的新点突变。”

David S Sinasac et al.: "Genomic Structure of the Adult-Onset Type II Citrullinemia Gene,SLC25A13,and Cloning and Expression of Its Mouse Homologue"Genomics. 62. 289-292 (1999)

David S Sinasac 等人：“成人发病 II 型瓜氨酸血症基因 SLC25A13 的基因组结构及其小鼠同源物的克隆和表达”基因组学。

佐伯武頼: "肝臓病学" 医学書院, 904 (1998)

佐伯武赖：《肝病学》医学书院，904（1998）