RNAウイルスを用いた中枢神経向性ベクターの開発

利用RNA病毒开发中枢神经系统热带载体

• 批准号: 10877102
• 负责人: 濱田 信之
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877102/
• 关键词: インフルエンザウイルス; T7プロモーター; T7ターミネーター; D型肝炎ウイルスリボザイム; T7RNAポリメラーゼ; cDNA

A型インフルエンザウイルスWSN株をクローン化cDNAから作製するために、まず、鋳型cDNA発現用ベクターとして、マルチクローニングサイトとD型肝炎ウイルスリボザイムの下流にT7ターミネーターを結合したベクター(pRbzT7ter)を作製した。そして、A型インフルエンザウイルスPR8株の8つのゲノム分節とWSN株のHA、NAゲノム分節のcDNAをプラスRNAを発現する向きにT7プロモーターの下流に接続した発現ベクターを作製した。とくに、NS1はインフルエンザウイルスの増殖に必須ではないので、それをコードするゲノム第8分節(NS)をそれぞれNS1、NS2のみをコードする鋳型に分割した。また、外来遺伝子を挿入するコンストラクトとして、NS(またはNS1)の両端を持つ84merの鋳型に挿入部位としてHind III部位を作ったcRNA、及びvRNAモデル鋳型を作製した。そして、それにマーカーとしてGFP、luciferase、CATを挿入したNS-GFP、NS-luciferase、NS-CATを作製した。インフルエンザウイルス遺伝子の発現用には、RNAポリメラーゼの3つのサブユニットとNPのオープンリーディングフレームをそれぞれT7プロモーターの下流に接続したベクター(pT7pol、pT7NP)を作製した。そして、それらを転写するために、T7RNAポリメラーゼを発現するワクチニアウイルスベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクターを作製した。

A type of WSN strain cDNA generation is controlled by the downstream T7 gene combination (pRbzT7ter). 8 of the 8 A-type PR8 strains were isolated from the HA and NA cDNA fragments of the WSN strain. NS1, NS2 and NS3 are the two main components of the NS1, NS2 and NS3. The entry site of the 84mer at the end of NS(NS1) is controlled by cRNA and vRNA. NS-GFP, NS-luciferase and NS-CAT are controlled by GFP, luciferase and CAT. The development and use of RNA fragments is controlled by the downstream connection of T7 fragments (pT7pol, pT7NP). T7RNA is a protein that can be used to control the growth of a protein.

项目成果

Kenji Masunaga: "Molecular mapping of influenza virus RNA polymerase by site-specific antibodies"Virology. 256. 130-141 (1999)

Kenji Masunaga：“通过位点特异性抗体对流感病毒 RNA 聚合酶进行分子图谱”病毒学。

N.Hamada: "Nucleotide sequence of the gene encoding the RNA polymerase and the 3′non-coding region of a bovine enterovirus Japanese isolate: Rapid synonymous substitutions between European and Japanese strains." Arch.Virol.143. 815-821 (1998)

N. Hamada：“编码牛肠道病毒日本分离株的 RNA 聚合酶和 3 非编码区的基因的核苷酸序列：欧洲和日本病毒株之间的快速同义替换。”（Arch.Virol.143） ）

豊田哲也: "感染分子機構から見た治療薬開発の方向性"治療学. 34. 44-49 (2000)

丰田哲也：“从感染分子机制的角度看治疗药物的开发方向”《Therapeutics》34. 44-49 (2000)。

Shoji Kaminaka: "Studies of Bovine Enterovirus Structure by Ultraviolet Resonance Raman Spectroscopy."J.Virol.Methods. 77. 117-123 (1999)

Shoji Kaminaka：“通过紫外共振拉曼光谱研究牛肠道病毒结构。”J.Virol.Methods。

Kenji Masunaga: "Molecular mapping of influenza virus RNA polymerase by site-specific antibodies." Virology. (in press).

Kenji Masunaga：“通过位点特异性抗体对流感病毒 RNA 聚合酶进行分子图谱分析。”