レンズ上皮細胞のアポトーシス誘導因子や増殖抑制因子の人工レンズへの提示

晶状体上皮细胞凋亡诱导因子和生长抑制因子向人工晶状体的呈现

• 批准号: 11132269
• 负责人: 丸野内 棣
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11132269/
• 关键词: アポトーシス; レンズ上皮細胞; TNFα; TRAIL; DR5

1)アポトーシス誘導リガンド受容体の発現探索。レンズ上皮細胞(LEC)で、TNFR1とDR5の発現をRT-PCRにより確認した。mRNAの発現は新鮮なレンズ上皮においてもまた培養されたLECにおいても確認された。これによりLECはTNFαとTRAILの二種のリガンドに対し感受性である可能性が示された。2)リガンド受容体タンパク分子の発現を免疫染色で検出した。TNFR1,TNFR2,DR5の発現が確認された。なおLECでDR5の発現が確認されたのはこれが初めてのことである。また、DR5の場合の抗体による染色パターンが新鮮な上皮組織と培養LECとでは異なっており、上皮組織では核内に受容体が蓄積していた。培養開始後一両日のうちに受容体の分布は細胞膜全体に拡がった。3)TNFαとTRAILを用いてELCに対する効果を試験した。両リガンドをそれぞれ単独で用いたこれまでの実験では、細胞増殖(MTT assay)は約10%の阻害に止まり、またDNA ladder法によっても顕著な変化は検出されなかった。この結果いずれもリガンドに応答してアポトーシスが誘導されるLECの割合が少ないことを示している。そこで抗アポトーシスへの経路(NF_kBの活性化)を遮断するためにActinomycin D(AD)をリガンドを投与する前に処理することによりLECにアポトーシスを誘導することを試みた。AD処理後にTNFαあるいはTRAILを投与して、TdTを用いたISNELによる確認したところ典型的な核内のDNA断片化が検出された。しかしAD単独によってもLECは死滅し培養系から失われるため、アポトーシス誘導のためのより正確な条件設定は今後の課題である。

1) the purpose of this study is to guide the exploration of the receptive body. The epithelial cells (LEC) and TNFR1 DR5 cells were confirmed by RT-PCR cells. MRNA has seen new signs of epithelium, epithelium, LEC, and so on. The possibility of the sensitivity test of the two categories of LEC TNF α trails is shown in this paper. 2) the immunoreactivity of the receptor was detected by immunostaining. TNFR1,TNFR2,DR5 is now confirming that it is not working. Now that you LEC the DR5, you will confirm that this is the first time you have heard about it. The new epithelial tissue was cultured in combination with DR5 and DR5 antibody staining. The epithelial tissue was incubated and the receptive body in the nucleus was stored in the epithelial tissue. One week after the start of the culture, the recipient cells were distributed throughout the cell membrane. 3) TNF α "TRAIL" with the word "ELC" and "fruit". This means that 10% of the total damage caused by MTT assay, and the DNA ladder method is used to prevent the infection. The results show that the LEC will be cut off and the message will be displayed if you want to respond. Do you want to block the Actinomycin D (AD)? After AD processing, TNF α was used to determine the number of TRAIL, and TdT was used to confirm that it was typical of intranuclear DNA fragmentation. If you want to use the AD system alone, you will need to know that the LEC is dead, and that you will not be able to make sure that the conditions are set correctly.