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葉緑体mRNA転写に関わる新規制御因子の分子遺伝学・分子生物学的研究

叶绿体mRNA转录相关新型调控因子的分子遗传学和分子生物学研究

基本信息

批准号：
11151230
负责人：
中野雄司
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11151230/
关键词：
葉緑体転写因子光化学系アルビノ One-Hybird screening

项目摘要

葉緑体遺伝子発現調節においては、RNA Polymerase複合体以外にも数多くの制御タンパク質の存在が予測され、近年遺伝子の同定遺伝子の同定等が進められている。本研究は、葉緑体研究においては新規な適用であるOne hybrid screening法を用いた分子生物学的アプローチ、またアルビノ突然変異体を用いた分子遺伝学的アプローチによって、更に新規な葉緑体遺伝子発現制御因子の同定・単離および機能解析を目的とした。葉緑体ゲノム上に存在し光化学系D2タンパク質をコードするpsbDは、光応答性プロモーター上流にエンハンサー領域が存在することが知られている。そこで、この領域の結合タンパク質候補cloneをOne hybrid screening法を用いてArabidopsis cDNA libraryより単離を試みた結果、bHLHモチーフを持つ新規なタンパク質が一種同定された。この遺伝子は、in vitro実験系(One hybrid system)、in vivo実験系(GFP融合タンパク質系の蛍光顕微鏡観察、突然変異体の単離とノザン解析)により、葉緑体に移行する塩基配列特異的結合な転写活性化タンパク質であることが確認された。これは、これは世界最初の葉緑体トランスアクティングファクター単離例であり、TFPD(transacting factor of plastid psdD LRP)と命名した。タバコアルビノ変異体aliは(albino by heavy ion beam)葉緑体mRNAの発現が特異的に低下した突然変異体であることが確認されている。このゲノムDNAについてRLGS法による検討にことにより、野生型タバコゲノムには存在するものの、アルビノ変異体ゲノムにおいては欠失された標識スポットを検出することには成功した。しかし、期間内には該当スポットのクローニングには至らなかった。

In addition to the RNA Polymerase complex, there are many regulatory factors for chloroplast gene expression. In recent years, there have been advances in the identification of chloroplast genes. This study aims to update the identification, isolation and functional analysis of chloroplast gene development control factors by using the One hybrid screening method in molecular biology. Chloroplasts exist in the upper part of the photochemical system. Photochemical system. One hybrid screening method is used to test the results of the Arabidopsis cDNA library. This gene is in vitro, in vivo, in vitro, in vivo, in vitro, in The first chloroplast in the world was named TFPD(transacting factor of plastid psdD LRP). The expression of chloroplast mRNA is specifically low and sudden. The RLGS method was successful in detecting the presence of DNA in the wild type. During this period, we will continue to work together.