小胞体タンパク質局在化に働くRer1タンパク質の分子シャペロン的役割
Rer1蛋白在内质网蛋白定位中的分子伴侣作用
基本信息
- 批准号:11153229
- 负责人:
- 金额:$ 1.6万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
- 财政年份:1999
- 资助国家:日本
- 起止时间:1999 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
これまでに我々は,出芽酵母のゴルジ体膜タンパク質Rer1pが、ゴルジ体に誤って輸送されてきたSec12p,Sec71p,Sec63pなどといった一群の小胞体膜タンパク質を認識し,ゴルジ体から形成されるCOP I小胞を介して小胞体へと送り返す新たな分子選別装置の一つであることを示唆してきた.しかしながら,これまでのところ,Rer1pとSec12pなどとの直接的な相互作用は,両者が膜タンパク質であることもあって検出することができなかった.そこで,本年度はまず,Rer1pとSec12pの直接的な相互作用をクロスリンク法によって解析した.その結果,Rer1pがSec12pの膜貫通領域を特異的に認識し,結合することがはじめて明らかとなり,Rer1pが新たなタイプの分子シャペロンである可能性が示唆された.また一方で,Rer1pの生体内における動態をリアルタイムで解析するために,緑色蛍光タンパク質(GFP)をN末端に結合した融合タンパク質(GFP-Rer1p)を構築した.このGFP-Rer1pはRer1pとしての活性を保持しており,細胞内において酵母のゴルジ体に見られるようなドット上の構造体に局在していた.解析の結果,GFP-Rer1pは小胞体からのタンパク質輸送に欠損を持つsec変異株では速やかに小胞体に蓄積するようになることから,Rer1p自身もゴルジ体ー小胞体間をリサイクリングしていることが示唆された.また,Rer1pのゴルジ体局在化に必要な領域を探索したところ,C末端側の細胞質領域が重要であることが判明した.さらに,ゴルジ体から小胞体,ゴルジ体層板間における小胞輸送に働くCOP I複合体(COP I)がRer1pのC末端側の細胞質領域と相互作用すること,COP Iに欠損を持つ変異株ではGFP-Rer1pが液胞へと誤って輸送されてしまうことなどから,Rer1pのゴルジ体局在化と小胞体へのリサイクリングはCOP Iによって厳密に規定されていることが明らかとなった.
こ れ ま で に I 々 は, budding yeast の ゴ ル ジ body membrane タ ン パ ク qualitative Rer1p が, ゴ ル ジ body に mistakenly っ て conveying さ れ て き た Sec12p, Sec71p, Sec63p な ど と い っ た a group of small cell body membrane タ の ン パ ク を know し, ゴ ル ジ body か ら form さ れ る COP I vesicular を interface し て small cell body へ と send り return す new た な molecular seeding device の a つ で あ る こ と を in stopping し て き た. し か し な が ら, こ れ ま で の と こ ろ, Rer1p と Sec12p な ど と の direct な は interaction, who struck が membrane タ ン パ ク qualitative で あ る こ と も あ っ て 検 out す る こ と が で き な か っ た. そ こ で, Ben Annual は ま ず, Rer1p と Sec12p の interact directly な を ク ロ ス リ ン ク method に よ っ て parsing し た. そ の results, Rer1p が Sec12p の transmembrane domain を know specific に し, combining す る こ と が は じ め て Ming ら か と な り, Rer1p が new た な タ イ プ の molecular シ ャ ペ ロ ン で あ る possibilities が in stopping さ れ た. ま た side で, Rer1p の born in vivo に お け る dynamic を リ ア ル タ イ ム で parsing す る た め に, light green 蛍 タ ン パ ク mass (GFP) を N terminal に し た fusion タ ン パ ク mass (GFP - Rer1p) を build し た. こ の GFP - Rer1p は Rer1p と し て の activity was を し て お り, intracellular に お い て yeast の ゴ ル ジ body に see ら れ る よ う な ド ッ ト on の constructs に bureau in し て い た. Parsing の results, GFP - Rer1p は small cell body か ら の タ ン パ ク mass transport に owe loss を hold つ SEC - different strains で は speed や か に small cell body に accumulation す る よ う に な る こ と か ら, Rer1p itself も ゴ ル ジ body ー を between small cell body リ サ イ ク リ ン グ し て い る こ と が in stopping さ れ た. ま た, Rer1p の ゴ ル ジ body bureau in に Necessary な を exploration し た と こ ろ, C terminal side の cytoplasmic domain important で が あ る こ と が.at し た. さ ら に, ゴ ル ジ body か ら small cell body, ゴ ル ジ layer between に お け る vesicular transport に 働 く COP I complexes (I) the COP が Rer1p の C terminal side の cytoplasmic domain と interaction す る こ と, COP I に owe loss を hold つ - different strains で は GFP - Rer1p が vacuole へ と mistakenly っ て conveying さ れ て し ま う こ と な ど か ら, Rer1p の ゴ ル ジ body bureau in turn と small cell body へ の リ サ イ ク リ ン グ は COP I に よ っ て 厳 dense に rules さ れ て い る こ と が Ming ら か と な っ た.
项目成果
期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Ken Sato: "The Arabidopsis thaliana RER1 gene family : its potential role in the endoplasmic reticulum localization of membrane proteins"Plant Molecular Biology. 41. 815-824 (1999)
Ken Sato:“拟南芥 RER1 基因家族:其在膜蛋白内质网定位中的潜在作用”植物分子生物学。
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Miyuki Sato: "The yeast RER2 gene,identified by ER protein localization mutations encodes cis-prenyltransferase,a key enzyme in the dolichol synthesis"Molecular and Cellular Biology. 19. 471-483 (1999)
Miyuki Sato:“通过 ER 蛋白定位突变鉴定的酵母 RER2 基因编码顺式异戊二烯基转移酶,这是多醇合成中的关键酶”《分子与细胞生物学》。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
B.Diane Hopkins: "Kex2p Cleavage Sites for Monitoring ER Localization and Intra-Golgi Transport of Proteins in Yeast"Methods in Enzymology. (in press).
B.Diane Hopkins:“用于监测酵母内质网定位和高尔基体内蛋白质运输的 Kex2p 裂解位点”酶学方法。
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- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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