Analysis of sperm-oocyte membrane fusion regulator in animal fertilization

动物受精精卵膜融合调节因子分析

• 批准号: 20H00466
• 负责人: 佐藤 健
• 金额: $ 28.7万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H00466/
• 关键词: 受精; 卵母細胞; 精子; 膜融合; エンドサイトーシス

1) 線虫において受精に関与する細胞膜タンパク質の探索と動態解析線虫 C. elegans の網羅的 RNAi 解析により発現抑制によって不妊となる遺伝子群 Ste (P0が不妊)、Stp (F1が不妊) が報告されているが、個々の解析はほとんど進んでいない。そこで、これらの遺伝子群から精子と卵母細胞の接着、繋留、融合ステップに関与しうる膜タンパク質を抽出し、現在RNAi法により受精のどの段階で異常を示すか等について順次表現型解析を進めている。また、これらの受精関連因子について酵母ツーハイブリッド法により相互作用因子を探索している。2) マウス卵母細胞に発現する細胞膜タンパク質の探索と動態解析マウス卵子は，性ホルモン等を用いた過剰排卵条件下においても～30個／成熟個体程度の細胞数しか得ることができない希少な生体材料であり、また卵を囲む数種類のタンパク質からなる巨大細胞外基質である透明帯がプロテオミクス解析における検出の感度や細胞蛋白質量の算定などを妨げる懸念がある。そこで、マウス未授精卵を構成するタンパク質の全容を知るため、野生型マウスの未受精卵を500個以上取得してタンパク質を多量に含む透明帯を除去した後、徳島大学の小迫英尊教授との共同研究により卵抽出液について網羅的質量分析を行った。その結果、透明帯を除く約1700種の卵構成タンパク質の同定に成功した。次に、この知見を活かし、野生型の未受精卵と受精卵、および受精異常を示す未受精卵についてそれぞれ約350個ずつ調製しプロテオミクス解析を行った。その結果、3000種以上の卵構成タンパク質を同定し、受精前後において増減する膜タンパク質を多数同定した。現在、これらについて順次、蛍光タンパク質を融合したものを卵において発現し、細胞内局在性等について解析を進めている。

1) nematodes に お い て fertilization に masato and す る membrane タ ン パ ク qualitative の explore と dynamic analytic nematode c. elegans の snare of RNAi parsing に よ り 発 now inhibit に よ っ て don't stretch marks と な る heritage 伝 subgroup Ste (P0 が don't stretch marks), the Stp が don't stretch marks (F1) The が report されて されて るが るが, and the 々 <s:1> is analyzed in んで ほとん <e:1> and んで. そ こ で, こ れ ら の heritage 伝 subgroup か ら sperm と oocytes の then, 繋 leave, fusion ス テ ッ プ に masato and し う る membrane タ ン パ ク を drew し, RNAi method now に よ り fertilization の ど の Duan Jie で abnormal を shown す か etc に つ い て progressive phenotype parsing を into め て い る. ま た, こ れ ら の fertilization masato even factor に つ い て yeast ツ ー ハ イ ブ リ ッ ド method に よ り interaction factor を explore し て い る. 2) ウス ウス oocyte に occurrence する cell membrane タ <e:1> パ <s:1> exploration と dynamic analysis ウス ウス oocyte Sexual ホ ル モ ン い を in た before turning under the condition of ovulation に お い て も ~ 30 / mature degree of individual cells の number し か have る こ と が で き な い rare な raw material で あ り, ま た eggs を 囲 む several kinds の タ ン パ ク qualitative か ら な る huge extracellular matrix で あ る transparent 帯 が プ ロ テ オ ミ ク ス parsing に お け る 検 out with や の sensitivity cell protein quality の account Youdaoplaceholder0 を を do not げる suspense がある. そ こ で, マ ウ ス not insemination eggs を constitute す る タ ン パ ク qualitative の full capacity を know る た め, wild type マ ウ ス の unfertilized egg を more 500 し て タ ン パ ク qualitative を に contain abundant む transparent 帯 を remove し の small island after た, Howard university professor forced the honour と の joint research に よ り eggs extract に つ い line quality analysis を っ て a net た. The そ そ result showed that the zona pellucida を removed く from approximately 1,700 species of sperm to form タ に パ and パ sperm quality <e:1>, which were successfully に and た. に, こ の knowledge を live か し, wild type の unfertilized egg と fertilized egg, お よ び abnormal fertilization を す in unfertilized egg に つ い て そ れ ぞ れ about 350 ず つ modulation し プ ロ テ オ ミ ク ス parsing line を っ た. そ の results, more than 3000 kinds of の eggs タ ン パ ク qualitative を with し, before and after fertilization に お い て rights reduce す る membrane タ ン パ ク qualitative を most be し た. Now, こ れ ら に つ い て in due course, 蛍 light タ ン パ ク qualitative を fusion し た も の を eggs に お い て 発 し now, intracellular bureau in the sexual に つ い て parsing を into め て い る.

项目成果

初期胚発生におけるリソソーム分解系を介した細胞膜成分リモデリング機構

早期胚胎发育过程中溶酶体降解系统介导的细胞膜成分重塑机制

• 发表时间: 2020
• 作者: 佐藤健;佐藤裕公;森田晶人;川崎一郎;Satouh Yuhkoh;佐藤裕公，森田晶人，佐藤健;佐藤健，佐藤美由紀，佐藤裕公，森田晶人．
• 通讯作者: 佐藤健，佐藤美由紀，佐藤裕公，森田晶人．

シンガポール国立大学(シンガポール)

新加坡国立大学（新加坡）

群馬大学生体調節研究所細胞構造分野ホームページ

群马大学生物调节研究所细胞结构系主页

グリシントランスポーターであるGlyt1aは胚発生に伴いRab5/Rab7陽性エンドソームを介してエンドサイトーシスされ分解される

Glyt1a 是一种甘氨酸转运蛋白，在胚胎发育过程中通过 Rab5/Rab7 阳性内体被内吞和降解。

• 发表时间: 2020
• 作者: 佐藤健;佐藤裕公;森田晶人;川崎一郎;Satouh Yuhkoh;佐藤裕公，森田晶人，佐藤健;佐藤健，佐藤美由紀，佐藤裕公，森田晶人．;森田晶人，佐藤裕公，佐藤健．
• 通讯作者: 森田晶人，佐藤裕公，佐藤健．

The mechanism underlying selective elimination of paternal mitochondria in C. elegans

线虫选择性消除父本线粒体的机制

• 发表时间: 2020
• 作者: Taeko Sasaki;Yasuharu Kushida;Ken Sato;Miyuki Sato
• 通讯作者: Miyuki Sato