GDNF遺伝子組み込みアデノウイルスを用いたパーキンソン病遺伝子治療の試み

使用GDNF基因整合腺病毒进行帕金森病基因治疗的尝试

• 批准号: 11670628
• 负责人: 柏原 健一
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11670628/
• 关键词: パーキンソン病; アデノウイルス; 神経栄養因子; GDNF; IGF-1; 遺伝子治療; ラット; 黒質; LacZ

昨年度の研究では、アデノウイルスベクターを用いてlacZ遺伝子をラット脳内に注入し、発現される蛋白の発現部位、経時変化を検討した。本年度は、黒質で十分なlacZ遺伝子の発現がみられた条件下で、GDNF遺伝子組み込みアデノウイルスベクターを投与し、6-OHDA毒性に対するドパミンニューロンの保護効果を検討した。また、変性抑制効果のメカニズムを調べ、神経細胞の変性、回復機序を検討する目的で、同じく神経栄養因子であるIGF-1の保護効果を検討した。実験1:ラットの一側黒質背側に、GDNFまたはLacZ遺伝子を組み込んだアデノウイルス(それぞれAdGDNF、AdLacZ)を注入した。一週間後、6-OHDA8μgを同側内側前脳束に注入した。1週間後、断頭し、黒質のチロシン水酸化酵素(TH)陽性細胞を検出、ドパミンニューロン障害へのGDNF保護作用を検討した。その結果、AdLacZ注入側ではTH陽性細胞数が健側の約10%であるのに比べ、AdGDNF注入側では約40%と、有意に多く残存していた。AdGDNFの注入側では6-OHDAによる黒質ドパミンニューロンの脱落が抑制されたと考えられた。一方、抗GDNF抗体を用い、AdGDNFによるGDNF発現を調べたところ、注入側黒質においてGDNFの発現が確認された。これらのことからAdGDNFの黒質近傍への注入により、黒質でGDNFが産成され、6-OHDAによる黒質ドパミンニューロンの脱落が抑制することが確認された。実験2:神経栄養因子導入による遺伝子治療の可能性を広げる目的で、IGF-Iの黒質ニューロン保護効果を同様のモデル動物を用い検討した。一側内側前脳束に6-OHDAを注入後、IGF-1を1日あたり1または10μgをミニポンプを用い14日間脳室内に注入した。この後アポモルフィンを投与して行動を観察したところ、IGF-1投与群では用量に比例して過敏行動が生じなくなっていた。黒質のTH陽性ニューロンは同様に脱落していた。本実験条件下ではIGF-1はドパミンニューロンの脱落を防げないが、神経終末での受容体感受性の変化を抑制したと考えられた。

In the last year, the lacZ was used to detect the location of the protein, and to make sure that the protein was detected. This year, there is a significant increase in the number of lacZ products. This year, there are significant changes in the health status of the sub-group, such as the subgroup of GDNF, the subgroup of 6-OHDA, and the toxicity of 6-OHDA. The results of sexual inhibition and sexual inhibition are sensitive to the disease, the nature of the cell, the sequence of the response mechanism, the purpose of the gene, and the protective factors of the same gene, such as IGF-1. This is the first time that GDNF has been blacked out, and that the sub-group of the LacZ has been injected into the hospital. After a few minutes, 6-OHDA8 μ g was injected into the front beam of the same tube. 1. After the treatment, the water acidifying enzyme (TH) was released, and the protective effect of GDNF was greatly affected. The results showed that the number of sexual cells injected with AdLacZ was about 10%, that of AdGDNF was about 40%, and that of residual cells was about 10%. AdGDNF injects 6-OHDA drugs into the bottle to prevent it from falling off. In one party, anti-GDNF antibody was used, AdGDNF antibody was detected by GDNF, and melanoma was injected into the body. GDNF antibody was used to confirm the infection. The AdGDNF was injected into the neighborhood, the GDNF was injected into the box, and the 6-OHDA was injected into it. Doctor 2: the divine factor is included in the possibility of treatment, the purpose of the IGF-I, the protection of the products and the use of the animal products. After the injection of 6-OHDA in the front of the tube, the IGF-1 was injected into the room on the 1st day after the injection of 10 μ g. In the future, the proportion of IGF-1 investment to group consumption is too high, which is too sensitive to health education. Black, TH, sex, sex and sex. Under this condition, IGF-1 is used to prevent the fall-off, and the receptivity is suppressed.