リーシュマニア原虫の8-アミノレブリン酸シンターゼ・フェロキラターゼについて

关于利什曼原虫的8-氨基乙酰丙酸合酶和亚铁螯合酶

• 批准号: 11670841
• 负责人: 上里 博
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11670841/
• 关键词: リーシュマニア原虫; エンドトリパーヌム原虫; ferrochelatase; cDNA

1)リーシュマニア原虫のferrochelataseのcDNAを同定するため、今まで報告されたferrochelataseの塩基配列、またアミノ酸配列も同様に検索し、ヒト、マウス、ウシ、ニワトリ、カエル、カビに共通な部分に4対のprimerを設定した。対象としたリーシュマニア原虫は、WHOに登録された14株、またコントロールとしてナマケモノから樹立されたエンドトリパーヌムの2株を用いた。使用したconsensus primerは下記に記載した。F1;5'-ATATTAATGYTRAACATGGG-3'F2;5'-ATTGGAGGCGGATCVCCSAT-3'F3;5'-CCCAACACAGCMCCBCAYAA-3'F4;5'-GGAGCACTATYGACNGRTGG-3'R1;5'-TCAATAGTRCTCCAYTTSAT-3'R2;5'-GACATCGGCAGNGAGTGRGC-3'R3;5'-GGACCAACCTKGGAYTGCCA-3'R4;5'-TCATACAGCGTYTCRATRTG-3'継代・培養した16種のリーシュマニア原虫から、total RNAを抽出し、cDNAを作製した。そのcDNAをtemplateとして、上記primerの組み合わせを用いてRT-PCRを行った。予想サイズに一致するいくつかのPCR産物が得られ、ゲルから切り出し、そのDNA断片をpT7 blue T vectorに組み込み、5HdαE.Coliを形質転換した。さらにplasmidを回収し、HITACHI SQ5500 sequencerでDNA断片の塩基配列を解読したが、ferrochelataseの塩基配列と相同性の高い結果は得られなかった。今後、PCRの条件やprimerを変えて、検討していく予定である。2)対象にした原虫のうち、ナマケモノから得られたEndotrypanumに単一のバンドが得られ、その塩基配列がリーシュマニア原虫とエンドトリパーヌムを区別可能であることが推測されたため、Am.J.Trop.Med.Hyg.に投稿したが、データが不十分とのコメントがあり、再投稿準備中である。

1) The cDNA sequence of ferrochelatase in the protozoan was identified. This report contains four pairs of primer for ferrochelatase gene base alignment, nucleotide alignment, and nucleotide alignment. 14 strains were recorded by WHO, and 2 strains were used by WHO. Use consensus primer to record F1; 5'-ATATTAATGYTRAACATGGG-3'F2; 5'-ATTGGAGGCGGATCVCCSAT-3'F3; 5'-CCCACAGCMCCCAYAA-3'F4; 5'-GGAGCACTATYGACNGRTGG-3'R1; 5'-TCAATAGTRCTCCAYTTSAT-3'R2; 5'-GACATCGGCAGNGAGTGRGC-3'R3; 5'-GGACCACTKGAYTGCCA-3'R4; 5'-TCACAGCGTYTCRATRTG-3'R3. The cDNA template and primer were used for RT-PCR. The PCR product was obtained from the DNA fragment fragment pT 7 blue T vector, 5HdαE.Coli, and the DNA fragment pT7 blue T vector was obtained from the DNA fragment pT7 blue T vector pT7 blue T vector. In addition, HITACHI SQ5500 sequencer was used to analyze the nucleotide sequence of DNA fragment, and the nucleotide sequence of ferrochelatase was used to analyze the nucleotide sequence of DNA fragment. In the future, PCR conditions will be changed from primer to primer. 2) For example, if you want to make a contribution, you can make a contribution. If you want to make a contribution, you can make a contribution. If you want to make a contribution, you can make a contribution.