サルモネラを用いた粘膜ワクチン開発(ネコ免疫不全ウイルスへの試み)

使用沙门氏菌开发粘膜疫苗（针对猫免疫缺陷病毒的尝试）

• 批准号: 11877050
• 负责人: 松井 英則
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kitasato Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877050/
• 关键词: サルモネラベクター; 粘膜免疫; ネコ免疫不全ウイルス; 粘膜ワクチン; ネコ免疫不全ウィルス

ネコ免疫不全ウイルス(FIV)のgag遺伝子をサルモネラのビルレンスプラスミド上のspv遺伝子の下流に組み込み、ΔphoP株とΔaroA株のS.typhimurium SR-11に導入しワクチン株とした(其々HM123sとHM125sと命名)。HM123sとHM125sはマクロファージの殺菌作用に対する抵抗能、腸管上皮細胞への侵入能あるいはin vitroでの菌の増殖速度は野生株と同じであったが、経口投与においても皮下投与においても病原性は認められなかった。またGag蛋白質はマクロファージ内の環境で産生が著しく増加した。次に7週齢の雌BALB/cマウスヘワクチン株を10日間隔で1-3回経口接種後の血清、盲腸糞、胆汁及び腸と肺胞の洗浄液中のGagに対するIgGとIgAの価をELISA法で測定した。Gagに対するIgGはいずれの場合においても誘導されなかったが、3回の経口投与群においてGag特異的分泌型IgAが胆汁、盲腸及び肺胞洗浄液において誘導された。またワクチン株間における差は認められなかった。以上の結果からワクチン株は抗原提示細胞には達しているが、体液性免疫を誘導するにはGagの発現量が不十分であると考えられた。従って今後はGag蛋白質の発現量を増やすか、産生したGag蛋白質を菌体外に分泌する系の構築が必要思われる。

The gag gene of FIV was introduced into S.typhimurium SR-11 (named HM 123s and HM 125s). HM123s and HM125s are resistant to the action of vitamin D, invasive ability of intestinal epithelial cells, and growth rate of bacteria in vitro. Gag protein is produced in the environment. IgG and IgA levels in serum, cecal feces, bile and lung lavage fluid were measured by ELISA after oral inoculation of female BALB/c strains at 7 weeks of age and 10 days of age. Gag specific secretory IgA is induced in bile, cecum and lung lavage in the presence of IgG in the three circuits of oral administration. The difference between the trees is not recognized. The above results indicate that the expression of GAG in cells is not very high, and humoral immunity is induced. In the future, it will be necessary to increase the amount of Gag protein discovered and construct the system that produces and secretes Gag protein outside the bacteria.

项目成果

川上貴敏(Kawakmi Takatoshi): "TTG as the initiation codon of Salmonella slyA,a gene required for survival within macrophage"Microbiology and Immunology. 43・4. 351-357 (1999)

Takatoshi Kawakami：“TTG 作为沙门氏菌 slyA 的起始密码子，是巨噬细胞内生存所需的基因”微生物学和免疫学 43·4 (1999)。

中村正彦(Nakamura Masahiko): "Hp感染Mongolian Gerbil胃底腺における壁細胞,粘膜頸細胞の形態学的変化"胃分泌研究会誌. 32. 43-46 (2000)

Masahiko Nakamura：“Hp感染的蒙古沙鼠胃底腺壁细胞和粘膜宫颈细胞的形态变化”胃分泌研究学会杂志32. 43-46 (2000)。

松井英則(Matsui Hidenori): "Effect of constitutively expressed phoP gene on the localization of Salmonella typhimurium inside the Mac-1 positive phagocytes"Microbiology and Immunology. 45・1. 79-83 (2001)

松井秀德：“组成型表达的 phoP 基因对鼠伤寒沙门氏菌在 Mac-1 阳性吞噬细胞内定位的影响”微生物学和免疫学 45・1（2001）。

中村正彦(Nakamura Masahiko): "消火管培養細胞に対するH.pylori接着様式の検討-共焦点レーザー顕微鏡による観察-"Progress in Medicine. 21・3(印刷中). (2001)

Masahiko Nakamura：“幽门螺杆菌对培养火管细胞的粘附模式的检查 - 使用共聚焦激光显微镜观察 -” 医学进展 21・3（出版中）。