卵胞発育調節機構解明のための卵胞三次元培養法の確立

建立三维卵泡培养方法阐明卵泡生长调控机制

• 批准号: 11877287
• 负责人: 下仲 基之
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877287/
• 关键词: 原子卵胞; 優勢卵胞; コラーゲンゲル; 3D培養; 原始卵胞; 成熟卵胞; 顆粒膜細胞; 温度感受性ポリマー; スフェロイド

卵母細胞の成熟過程や卵胞の生理的機能をin vitroで再現し,そこでの情報伝達機構を解明するためには,卵胞構成細胞を含んだ卵胞の三次元培養を行なうことが必要不可欠である。培養皿上での2D培養と異なりcollagenゲルを用いた3D培養では,原始卵胞は卵胞腔のある状態へと発育し,完全な腔構造を形成するに至った。ここで見られた卵胞の発育はFSHの濃度依存的に促進され,発育卵胞にLHを投与すると卵胞が崩壊することを確認した。このように,本研究で確立した3D培養法が生理的条件に近い卵胞の発育状態を維持していると考えられたため,さらに以下の点について詳細に検討した。卵胞の発育過程において,より成熟した卵胞が成熟度の低い卵胞の発育を阻止し,その結果いわゆる「優勢卵胞」の選択がおこるという機構が考えられている。そこでこの現象をin vitroで再現するため,まず採取した卵胞を実体顕微鏡下で発育状態に応じて選別し,それぞれを2Dまたは3D培養した。一定期間培養した後,発育卵胞の培養液を未発育卵胞の培養液に添加し,未発育卵胞の発育状態を観察した。その結果,3D培養した発育卵胞の培養液を3D培養している未発育卵胞に加えた場合,その発育が50%以上抑制された。一方,2D培養系の培養液を3D培養系に加えた場合,3D培養系の培養液を2D培養系に加えた場合とも,発育の抑制は確認されなかった。これらより,3D培養系で培養した卵胞は未発育卵胞に対する発育抑制物質を分泌していること,さらにそのような抑制物質による制御に適切に反応するということが示唆された。それに対し2D培養系ではいずれの現象も確認できなかった。以上本研究は,卵胞間コミュニケーションという点においても極めて生理的条件に近い卵胞の発育状態を再現していると考えられ,今後卵胞発育の機構解明に大きく役立つことが期待される。

The maturation process of oocyte and the physiological function of oocyte In vitroでReappearanceし,そこでのInformation伝达社するためには, Egg cell composition cellをContainsんだOocyteの三dimensional cultureを行なうことがNecessary and indispensableである. The original 2D culture on the petri dish and the 3D culture of the different collagen were carried out, and the original egg cell and the egg cell cavity were cultivated and the complete cavity structure was formed.ここで见られたoocystsの発磊することをconfirmationしたの発生はFSHのconcentration-dependent にstimulationされ,発raised ovumにLHをinvestment and するとovocyte collapse 壊することをconfirmation. This study established the physiological conditions of the 3D culture method and the development status of the egg cells.をMaintain していると卡えられたため, さらにThe following points are についてDetails に検说した. The growth process of the egg cell is low, the egg cell is mature and the egg cell's maturation is low, and the egg cell's growth is blocked. ,そのRESULTSいわゆる「Advantage Egg Cell」の选択がおこるという Institutionが考えられている.そこでこのphenomenonをin It reproduces the growth status of egg cells in vitro and reproduces them under a microscopic microscope, and selects and selects the egg cells in vitro, and cultivates them in 2D and 3D culture. After culturing for a certain period, the culture medium of the incubated oocytes is added and the culture medium of the unincubated oocytes is added, and the incubation status of the unincubated oocytes is checked. As a result, if the culture medium of 3D cultured ovocytes was used and the ovocytes were not grown in 3D culture, the ovocytes were inhibited by more than 50%. On the one hand, the culture medium of the 2D culture system is the case of the 3D culture system, the culture medium of the 3D culture system is the case of the 2D culture system, and the suppression of the growth is confirmed.これらより, 3D culture system, cultured egg cells, undeveloped egg cells, secretion of growth inhibitory substances, etc.ること, さらにそのような inhibiting substance によるcontrol に appropriately cut にreaction 応 するということが说唆された.それに対し 2D culture system ではいずれのphenomenon もconfirmation できなかった. As mentioned above in this study, the physiological conditions between the egg cells and the egg cells are close to each other. The reproductive state has been reappeared, and we are looking forward to the establishment of the egg culture institution in the future.