優勢卵胞ダブル選抜モデルによるウシ卵胞選抜遺伝子の機能解析と排卵誘起法への展開

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ウシ卵胞におけるセリンプロテアーゼインヒビターファミリー遺伝子発現の解析セリンプロテアーゼインヒビター(SERPIN)は、線溶系、炎症系、細胞分化などに関与するプロテアーゼ群を制御する。本研究では、ウシ卵胞におけるSERPINファミリー遺伝子の発現および局在を解析した。黒毛和種雌ウシより、直径が最大の優勢卵胞(10.7±0.7mm)と二番目に大きい次席卵胞(7.8±0.2mm)を採取した。各卵胞から総RNAを抽出し、ウシオリゴDNAマイクロアレイおよびリアルタイムPCR法を用いて、SERPINファミリーの遺伝子発現を解析した。さらに、食肉処理場由来のウシ卵胞(直径>8mm)を、卵胞液中ステロイド濃度を基に健常または閉鎖に分類し、マイクロアレイ解析で発現に変化が見られたSERPINのうち、ウシ卵胞で発現していることが初めて明らかとなった4個について、in situハイブリダイゼーション法によりmRNA発現局在を解析した。マイクロアレイ解析の結果、ウシ卵胞において11個のSERPIN遺伝子の発現が認められた。優勢卵胞では5個のSERPIN遺伝子(SERPINA5,B6,E2,F2,H1)の発現が高く、次席卵胞では2個(SERPINE1,G1)の発現が高いことが明らかとなった。また、In situハイブリダイゼーションの結果、SERPINA5、SERPINB6およびSERPINF2 mRNAは健常卵胞の顆粒層にのみ局在し、SERPING1 mRNAは閉鎖卵胞の顆粒層および卵胞膜で発現していることが明らかとなった。以上から、SERPINファミリーがウシ卵胞の健常性の違いにより特徴的な発現を示し、卵胞発育および閉鎖に関与している可能性が示された。