鏡像四肢多指趾症の遺伝子単離

镜像多指症的基因分离

• 批准号: 11877310
• 负责人: 山野辺 裕二
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877310/
• 关键词: 染色体転座; ポジショナルクローニング; 疾患遺伝子; 新規遺伝子; 遺伝子発現; 鏡像四肢多指趾症; 14q13; 分子遺伝学

染色体転座t(2;14)(p23.3;q13)を伴う後極性鏡像多指症患者の転座切断点に、同疾患の原因遺伝子が局在し、転座によって遺伝子断裂が生じ発症したとの仮説の基に、転座切断点のクローニングと遺伝子単離を目的として研究を開始した。(1)染色体転座のうち、14q13領域に全長1.2-MbのBAC/PACクローンから成るコンティグを構築し、各クローンを用いてFISH法により転座点の同定を行った。その結果、14q13転座点はBAC B368に存在することが明らかになった。(2)Exon trap法、ランダムシーケンス法、CpGアイランドシーケンス法およびゲノムデータベースを利用し、転座点付近の遺伝子の同定を行った。その結果、既知遺伝子HNF3aと新規遺伝子(ORACLEと便宜的に命名)の一部を単離した。ORACLEの配列とデータベース上の登録データを総合した結果、同1.2Mb領域にはHNF3aとORACLE以外の遺伝子は存在しない。HNF3aは糖尿病原因遺伝子の1なので除外し、ORACLEが後極性鏡像多指症遺伝子の候補である。(3)ORACLEは、ゲノム上で400kb、コード領域が2kb、15個のエクソン(開始コドンはエクソン4)から成り、477アミノ酸をコードする。転座切断点はイントロン10または11にあり、患者ではコード領域が転座により断裂していた。(4)ノーザンブロット解析では、約1.2kbの転写物が成人の心・肝・骨格筋・腎・膵で発現し、脳・肺・胎盤では発現がない。胎児組織では弱く発現している。(5)マウスOracleホモログの一部をクローニングし、9,10,11,12週齢マウス胎児における全組織in situ hybridizationを行い、発現を確認したが、肢芽特異的な発現は未確定である。(6)類似の鏡像多指症患者2名においてORACLEの変異解析を行ったが、疾患特異的変異は未同定である。

In patients with post-morbid polydactyly, the chromosome locus t (2bot 14) (p23.3umbq13) was cut off at the pedestal site, the cause of the disease was at the same time, the cause of the disease was broken, and the etiology of the disease was dissected. (1) the total length of chromosomal loci in 14q13 field is 1. 2-Mb BAC/PAC loci. Each chromosome locus is the same as that in the same location by FISH method. The results show that there is a link between 14q13 and BAC B368. (2) the methods of Exon trap, CpG, CpG and so on are the same as those of the same location. The result of the test, the new specification of the known HNF3a (the cheap name of the ORACLE), is one of the most expensive. The results of the registration and registration of the ORACLE database are similar to those of other users in the field of 1.2Mb, which are not available in the HNF3a ORACLE. The causes of diabetes in HNF3a were excluded, and the symptoms of polydactyly after ORACLE were excluded. (3) ORACLE, online 400kb, 2kb in the field of trade, 15 overseas sales (starting with the launch of the first round of sales), and 477 percent of the sales volume. Cut-off point