新規エンド-β-マンノシダーゼの精製と性質

新型内切β-甘露糖苷酶的纯化及性质

• 批准号: 00J01833
• 负责人: 佐々木 明子
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J01833/
• 关键词: エンド-β-マンノシダーゼ; 酵素; 糖タンパク質; N-配糖体糖鎖; ユリの花

テッポウユリの花より精製したエンド-β-マンノシダーゼの基質特異性について調べた。還元末端をピリジルアミノ化した糖鎖Manα1-6Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc-PAに対する活性を100として3回の平均値をとって調べたところ、Manα1-6Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc-Peptideは300、Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc-Peptideは44、Manα1-6Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAcは86の比で加水分解され、Manα1-6(Manα1-3)Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc-Peptideは加水分解されず、還元末端がピリジルアミノ化された糖鎖より天然に近い形であるPeptideに結合した糖鎖の方が加水分解されやすいことが明らかとなった。さらにManα1-6Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc-Peptideを基質とした時のKm値は0.075mMと求められ、これは以前Manα1-6Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc-PAを基質として測定した時の値の19分の1であった。本酵素の局在について各器官の粗酵素溶液の活性を検出することにより調べたところ、本酵素活性は植物体中の至る所で検出され、あらゆる所に存在すると考えられた。また今回調べた中では、鱗茎において比活性が最も高かった。エンド-β-マンノシダーゼの精製酵素は現在SDS-PAGEで3本のヘテロトリマーとして検出されているが、精製途中段階でプロテアーゼ等により加水分解されている可能性が考えられた。そこで精製初期の段階でプロテアーゼインヒビターを加えて精製を行ったところ、今回行った条件下においても以前と同様なヘテロトリマーとして検出された。

It's a very delicate process. It's a very delicate process. The activity of Manα1-6Manβ1-4GlcNAcβ1 - 4GlcNAcβ1 - 4GlcNAc-PA was 100%. The average activity of Manα1 - 6 Manβ1-4GlcNAcβ1- 4GlcNAc-Peptide was 300%. Manβ1- 4GlcNAc β 1 - 4GlcNAc-Peptide was 44%. Manα 1-6Manβ1- 4GlcNAc β 1 - 4GlcNAc-PA was 86%. Manα1-6(Manα1-3)Manβ1- 4GlcNAcβ1-4GlcNAc-Peptide Hydrolysis, Reduction-terminal Polymerization, Glycochain Polymerization For Manα1-6Manβ1-4GlcNAcβ1 - 4GlcNAc-Peptide, the Km value was 0.075mM. For Manα1-6Manβ1- 4GlcNAcβ1- 4GlcNAc-PA, the Km value was 19 minutes. The enzyme activity is detected in crude enzyme solution of various organs, and the enzyme activity is detected in all parts of plants. The highest activity is in the bulb. The possibility of hydrolysis of the purified enzyme in SDS-PAGE was examined. In the initial stage of refining, the first stage of refining is the first stage of refining.