ゼブラフィシュ卵黄細胞の中胚葉誘導活性に関与する遺伝子の単離と機能解析

斑马鱼卵黄细胞中胚层诱导活性相关基因的分离和功能分析

• 批准号: 00J04209
• 负责人: 坂口 拓哉
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The Graduate University for Advanced Studies
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J04209/
• 关键词: ゼブラフィシュ; 卵黄多核層; 中胚葉誘導; 内胚葉; 226D7; in situ hybridization screening

脊椎動物の初期発生において、中胚葉および内胚葉の形成はその後の形態形成の基礎となる重要な過程である。これまでに、小型脊椎動物モデルであるゼブラフィシュにおいては、最も初期の中胚葉と内胚葉は、卵黄細胞からのシグナルによって誘導されることを明らかになっている。しかし、その分子的機構については不明な点が多く、特に中胚葉誘導や内胚葉形成に関与する機構については分かっていない。そこで本研究では、卵黄細胞特異的に発現する遺伝子を多数単離し、得られた遺伝子の機能解析をする事を通して、卵黄細胞の持つ誘導能の分子的機構を明らかにすることにした。そのためにまず、卵黄細胞特異的遺伝子を濃縮したサブトラクションライブラリを作成し、そのライブラリから約600クローンを独自に開発したin situ hybridization screening法でスクリーニングした。その結果、30以上の独立な卵黄細胞で発現するクローンを単離する事に成功した。さらに、それらのクローンをモルフォリノオリゴで特異的に機能阻害することにより、上記の現象に関与するクローンを探した。その結果、モルフォリノオリゴで機能を阻害すると内胚葉を全て欠失する、226D7クローンを見出した。226D7クローンの遺伝子全長は新規のSOX型転写因子をコードしており、発生の初期、胞胚期から原腸期胚期にかけて、卵黄細胞と内胚葉前駆細胞で発現していた。さらにそれらの発現は内胚葉形成に重要な働きをすることがすでに知られていたNodalシグナルの下流で制御されていることが分かった。また、モルフォリノオリゴによる機能阻害実験と合成RNAによる機能亢進実験の結果、226D7は初期内胚葉の形成に必要十分な機能を持っていることを明らかにした。

The early development of vertebrates, mesoderm and endoderm formation, and later morphogenesis are important processes. In small vertebrates, there is no evidence that the embryonic mesoderm, endoderm and yolk cells are induced. The molecular mechanism is not clear, especially the relationship between mesoderm induction and endoderm formation In this study, we investigated the molecular mechanisms for yolk cell-specific expression of proteins and their functions. The vitelline cell-specific gene was concentrated and developed independently in situ hybridization screening method for the production of vitelline protein. The results showed that more than 30 independent yolk cells were successfully isolated from each other. In addition to the above, the above phenomena are also explored. As a result, the function of the embryo is blocked, and the embryo is completely lost. 226D 7 is displayed. 226D7 gene length changes to SOX gene expression factors, early stage of development, embryonic stage, gastrula stage, yolk cells and endodermal preembryonic cells. The development of the embryo is important for the development of the embryo. 226D7 The function of inhibiting the synthesis of RNA is essential for the formation of embryo in the early stage.

项目成果

Sakaguchi T., Mizuno T., Takeda H.: ""Formation and patterning roles of the yolk syncytial layer." In Pattern Formation in Zebrafish"Springer-Verlag. Ed. L. Solnica-Krezel. (2002)

Sakaguchi T.、Mizuno T.、Takeda H.：“卵黄合胞体层的形成和图案形成作用。”《斑马鱼的图案形成》，Springer-Verlag。