小型霊長類コモンマーモセットを用いたヒト造血キメラの作成研究

利用小型灵长类狨猴构建人类造血嵌合体的研究

• 批准号: 00J07945
• 负责人: 曽田 泰
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: The University of Tokyo (2001-2002)Gunma University (2000)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J07945/
• 关键词: 造血幹細胞; コモンマーモセット; ヒト造血キメラ; シュードタイプレンチウィルスベクター; 染色体DNA; 遺伝子組み込み; NOD-SCIDマウス; DNAマイクロアレイ

本研究では、ヒト造血幹細胞をコモンマーモセットに移植し、ヒト造血キメラを作成する事を目的としている。昨年度までに、水疱性口内炎ウイルス(VSV)シュードタイプレンチウイルスベクター[HIV(VSV)]が造血幹細胞を含むヒト血液細胞に対し、非常に優れた遺伝子導入効率および長時間安定した遺伝子発現を示すことを報告した。すなわち、ヒト造血肝細胞でほぼ100%の細胞に遺伝子導入が可能となり、また、増殖能、生存率、分化能および細胞表面抗原の発現にも影響を及ぼさないことが判った。造血細胞コロニーアッセイでも、HIV(VSV)ベクターにより100%のコロニーで導入遺伝子が認められた。また、染色体DNAへの組み込みも全てのコロニーで確認された。一方、これまで頻用されてきたマウス白血病ウイルスベクターの改良も行ったが、VSVシュードタイプ化後も造血細胞への遺伝子導入効率は100%地殻まで達したものの、染色体DNAへの組み込みはわずか、5%にすぎなかった。従って、効率よい染色体DNAへの組み込み効率がHIV(VSV)ベクターによる導入遺伝子の長期安定発現への大きな要因と考えられた。今年度は、レンチウイルスベクターによる遺伝子導入が造血細胞の遺伝子発現に及ぼす影響をDNA microarray法で解析したが、23,000種類の遺伝子発現に対してこの遺伝子導入法自体は殆ど影響をおよぼさず、安全性の高い方法であることが確認された。従って、ヒト造血モデル動物の作製においてほぼ理想的な遺伝子導入系が確立されたと考えられる。さらに、この方法で遺伝子導入した造血幹細胞をNOD-SCIDマウスに移植したところ、種々の分化段階の血液細胞におよぶ造血キメラが成立することが確認されたことを昨年報告したが、今年度は、正常免疫照射マウスへの移植実験を行った。500cGy以上の照射にて造血キメラの成立が確認されたが、NK細胞を抗Asialo-GM1抗体にて抑制する前処置により、さらに照射量を減らしてキメリズムを成立させることが可能であった。GFP遺伝子導入造血幹細胞を移植した場合にも同様の結果が得られたので、現在、多剤耐性(MDR)遺伝子導入肝細胞移植実験を開始している。今後、このマウスモデルにおいてin vivoでのヒト造血細胞の薬剤選択が可能であるか検討し、さらにコモンマーモセットもでるでの検討を行う予定である。

The aim of this study was to establish a system for hematopoietic stem cell transplantation and transplantation. This is the first report on vesicular endostomatitis [HIV(VSV)], which affects hematopoietic stem cells and blood cells, particularly on the rate of gene introduction and long-term stability of gene expression. 100% of hematopoietic hepatocytes are affected by gene transfer, including the ability to proliferate, survive, differentiate, and express cell surface antigens. Hematopoietic cells, HIV (VSV), HIV(VSV), HIV), HIV(VSV), HIV), HIV (VSV), HIV (VSV), HIV), HIV (VSV), HIV (VSV), HIV) The chromosome DNA sequence was identified. The gene introduction rate of hematopoietic cells after VSV transformation was 100% in the crust and 5% in the chromosome DNA organization. A study of the major causes of long-term stable development of HIV(VSV) introduced genes This year, DNA microarray analysis of 23,000 types of gene expression in hematopoietic cells was performed to confirm the safety of the gene introduction method. An ideal gene introduction system was established for the production of hematopoietic cells. This method is used to introduce hematopoietic stem cells into NOD-SCID cells for transplantation. It is also used to confirm the establishment of hematopoietic stem cells in differentiated stages. For irradiation above 500cGy, the establishment of hematopoiesis was confirmed, and NK cells were inhibited by anti-Asialo-GM1 antibodies. For irradiation above 500 cGy, the establishment of hematopoiesis was confirmed, and NK cells were inhibited by anti-Asialo-GM1 antibodies. GFP gene transfer into hematopoietic stem cell transplantation, the same results were obtained, and now, MDR gene transfer into liver cell transplantation began. In the future, the selection of hematopoietic cell agents in vivo is possible, and the selection of hematopoietic cells in vivo is scheduled.

项目成果

Kiyoko Izawa, et al.: "Multilineage differentiation and lethat GVHD-like syndrome after transplantation into NOD/SCID mice of common marmoset CD34^+ cells"Blood. 100・11. 153b-153b (2002)

Kiyoko Izawa 等人：“普通狨猴 CD34^+ 细胞移植至 NOD/SCID 小鼠后的多谱系分化和 lethat GVHD 样综合征”血液 100・11（2002）。

Yuansong Bai, et al.: "Effective transduction and stable transgene expression in human blood cells by a third-generation lentivral vector"Gene Therapy. (in press). (2003)

Yuansong Bai等人：“第三代慢病毒载体在人血细胞中有效转导和稳定转基因表达”基因治疗。

Minghan Chen, et al.: "Isolation of candiate peptides which preferentially bind to hematologic malignancies from phage-display libraries"Blood. 100・11. 487b-487b (2002)

Minghan Chen 等人：“从噬菌体展示文库中分离优先结合血液恶性肿瘤的候选肽”Blood.100·11。

Yasushi Soda, et al.: "Maxizyme, a novel ribozyme, induces cell death of Philadelphia chromosome positive Acute Lymphoblastic leukemia(Ph^+ ALL)"Blood. 100・11. 656a-656a (2002)

Yasushi Soda 等人：“Maxizyme，一种新型核酶，诱导费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病（Ph^+ ALL）的细胞死亡”血液。100・11。

Masamitsu Harata, et al.: "Development of a new targeting therapy for Ph^+ ALL : anti-CD19 antibodybinding liposome containing STI571 effecientry killed Ph^+ ALL cells"Blood. 100・11. 198a-198 (2002)

Masamitsu Harata 等人：“针对 Ph^+ ALL 的新靶向疗法的开发：含有 STI571 的抗 CD19 抗体结合脂质体有效杀死 Ph^+ ALL 细胞”血液 100・11（2002）。