甲殻類の脱皮を制御するペプチドの生理作用、血中動態、産生分泌調節に関する研究

研究甲壳类动物蜕皮的生理效应、血液动力学以及控制蜕皮的肽的产生和分泌调节

• 批准号: 00J08200
• 负责人: 大平 剛
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J08200/
• 关键词: クルマエビ; 甲殻類; 脱皮; 脱皮抑制ホルモン

1.クルマエビ脱皮制御ホルモン(MIH)の測定系の確立昨年度、大腸菌で発見させた組換えクルマエビMIHに対する抗体を用いて、競合ELISAによるクルマエビMIHの測定系を確立した。本年度はさらに感度をあげるべく、二抗体サンドイッチELSA法によう測定系の確立を試みた。しかしながら、検出限界は昨年度確立した競合ELISAとほぼ同程度の50pg(5fmol)/wellであった。今後、より感度の高い標識法の検討や、より親和性の高い抗体を新たに作製するなどの工夫が必要と考えられた。2.クルマエビMIH様ペプチドのcDNAクローニングごく最近、香港の研究グループによりMIHと相同性を有するペプチドがクルマエビに存在することが示唆された。そこで、そのMIH様ペプチドをコードするcDNAをRT-PCR、3'-および5'-RACE法を用いて単離した。その結果、このペプチドはクルマエビMIHと68%の相同性を有していた。次に、MIH様ペプチドの組織別遺伝子発見をRT-PCRにより調べた。その結果、MIH様ペプチドは眼柄、胸部神経節、腹部神経節などの神経組織で遺伝子発現が観察された。3.クルマエビMIH様ペプチドの生物活性単離したMIH様ペプチドのcDNAを加工し、発現ベクターに組み込み、大腸菌を用いて組換えMIH様ペプチドを発現させた。得られた組換えMIH様ペプチドはin vitro培養系におけるY器官での脱皮ホルモン(エクジステロイド)の合成を抑制したものの、その活性はMIHと比べて約1/10と弱いものであった。このことから、クルマエビのMIH様ペプチドは生体内で脱皮抑制ホルモンとして働いているのではなく、何か他の生物活性を担っている可能性が高いと思われた。

1. Establishment of MIH assay system, detection of E. coli, detection of MIH antibody, and establishment of MIH assay system for competitive ELISA. This year, the sensitivity test was established. The limit was established at 50pg(5fmol)/well. In the future, it is necessary to study the new method of high sensitivity identification and high affinity antibody production. 2. MIH cDNA library. Recently, Hong Kong's research has been conducted on MIH identity. The cDNA sequence of the two methods is RT-PCR, 3'-RACE and 5'-RACE. 68% of the results were identical. Second, MIH selection of tissue specific gene discovery RT-PCR The results of MIH were as follows: Eye stalk, thoracic nerve segment, abdominal nerve segment, and nerve tissue. 3. The biological activity of the MIH sample is processed, the expression of the MIH sample is detected, and the expression of the MIH sample is detected. In vitro culture system, the activity of MIH was about 1/10 of that of Y organ, and the synthesis of MIH was inhibited. The possibility of inhibiting desquamation in vivo is high.

项目成果

C.Krungasem, T.Ohira, W.-J.Yang, R.Abdullah, H.Nagasawa, K.Aida: "Identification of two distinct molt-inhibiting hormone-related peptides from the tiger prawn Penaeus monodon"Marine Biotechnology. 4巻2号. 132-140 (2002)

C.Krungasem、T.Ohira、W.-J.Yang、R.Abdullah、H.Nagasawa、K.Aida：“斑节对虾中两种不同的蜕皮抑制激素相关肽的鉴定”海洋生物技术 4。第 2 卷. 132-140 (2002)

T.Ohira, H.Katayama, K.Aida, H.Nagasawa: "Expression of a recombinant crustacean hyperglycemic hormone of the kuruma prawn Penaeus Japonicus in methylotrophic yeast Pichia pastoris"Fisheries Science. 69巻1号. 95-100 (2003)

T.Ohira、H.Katayama、K.Aida、H.Nagasawa：“日本对虾重组甲壳动物高血糖激素在甲基营养酵母毕赤酵母中的表达”，《渔业科学》，第 69 卷，第 1 期，第 95-100 期。 (2003)