甲殻類の脱皮を制御するペプチドの生理作用、血中動態、産生分泌調節に関する研究

研究甲壳类动物蜕皮的生理效应、血液动力学以及控制蜕皮的肽的产生和分泌调节

• 批准号: 00J08200
• 负责人: 大平 剛
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J08200/
• 关键词: クルマエビ; 甲殻類; 脱皮; 脱皮抑制ホルモン

1.クルマエビ脱皮制御ホルモン(MIH)の測定系の確立昨年度、大腸菌で発見させた組換えクルマエビMIHに対する抗体を用いて、競合ELISAによるクルマエビMIHの測定系を確立した。本年度はさらに感度をあげるべく、二抗体サンドイッチELSA法によう測定系の確立を試みた。しかしながら、検出限界は昨年度確立した競合ELISAとほぼ同程度の50pg(5fmol)/wellであった。今後、より感度の高い標識法の検討や、より親和性の高い抗体を新たに作製するなどの工夫が必要と考えられた。2.クルマエビMIH様ペプチドのcDNAクローニングごく最近、香港の研究グループによりMIHと相同性を有するペプチドがクルマエビに存在することが示唆された。そこで、そのMIH様ペプチドをコードするcDNAをRT-PCR、3'-および5'-RACE法を用いて単離した。その結果、このペプチドはクルマエビMIHと68%の相同性を有していた。次に、MIH様ペプチドの組織別遺伝子発見をRT-PCRにより調べた。その結果、MIH様ペプチドは眼柄、胸部神経節、腹部神経節などの神経組織で遺伝子発現が観察された。3.クルマエビMIH様ペプチドの生物活性単離したMIH様ペプチドのcDNAを加工し、発現ベクターに組み込み、大腸菌を用いて組換えMIH様ペプチドを発現させた。得られた組換えMIH様ペプチドはin vitro培養系におけるY器官での脱皮ホルモン(エクジステロイド)の合成を抑制したものの、その活性はMIHと比べて約1/10と弱いものであった。このことから、クルマエビのMIH様ペプチドは生体内で脱皮抑制ホルモンとして働いているのではなく、何か他の生物活性を担っている可能性が高いと思われた。

1。建立了一种用于测量紫菜虾蜕皮激素（MIH）的系统，我们建立了一种用于使用竞争性ELISA测量的系统，该系统使用竞争性ELISA使用抗体反对重组型牛肉虾MIH，该抗体是在Escherichia coli中发现的。今年，为了进一步提高灵敏度，我们尝试使用两种抗体三明治ELSA方法建立一个测量系统。但是，检测限量为50pg（5fmol）/井，几乎与去年成立的竞争ELISA相同。据认为，将来有必要研究更敏感的标签方法并创建具有更高亲和力的新抗体。 2。最近的大虾Mih样肽cDNA克隆，香港的一个研究小组表明，大虾中存在与大虾同源性的肽。因此，使用RT-PCR，3'-和5'-Race方法分离编码MIH样肽的cDNA。结果，该肽与Kuruma Shrimp MiH具有68％的同源性。接下来，通过RT-PCR研究了组织特异性基因的基因。结果，在眼部茎，胸神经节和腹神经节等神经组织中观察到MIH样肽的基因表达。 3。乌鲁玛虾MIH样肽的生物学活性。分离的MIH样肽的cDNA被加工，掺入表达载体中，并使用大肠杆菌表达重组MIH样肽。尽管所得的重组MIH样肽抑制了体外培养系统中Y器官中摩托激素（ecdysteroid）的合成，但与MIH相比，其活性约为1/10。这表明库鲁马虾的MIH样肽在体内不可能充当蜕皮抑制剂，但可能是其他某些生物学活性的原因。

项目成果

T.Ohira, H.Katayama, K.Aida, H.Nagasawa: "Expression of a recombinant crustacean hyperglycemic hormone of the kuruma prawn Penaeus Japonicus in methylotrophic yeast Pichia pastoris"Fisheries Science. 69巻1号. 95-100 (2003)

T.Ohira、H.Katayama、K.Aida、H.Nagasawa：“日本对虾重组甲壳动物高血糖激素在甲基营养酵母毕赤酵母中的表达”，《渔业科学》，第 69 卷，第 1 期，第 95-100 期。 (2003)

C.Krungasem, T.Ohira, W.-J.Yang, R.Abdullah, H.Nagasawa, K.Aida: "Identification of two distinct molt-inhibiting hormone-related peptides from the tiger prawn Penaeus monodon"Marine Biotechnology. 4巻2号. 132-140 (2002)

C.Krungasem、T.Ohira、W.-J.Yang、R.Abdullah、H.Nagasawa、K.Aida：“斑节对虾中两种不同的蜕皮抑制激素相关肽的鉴定”海洋生物技术 4。第 2 卷. 132-140 (2002)