機能探索分子を用いた、容量依存性Ca^<2+>流入におけるIP_3受容体の機能解明

使用功能发现分子阐明 IP_3 受体在体积依赖性 Ca^<2+> 流入中的功能

• 批准号: 00J09553
• 负责人: 井上 尊生
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J09553/
• 关键词: カルシウム; 小分子CALT; IP_3受容体

IP_3の1位のリン酸にクロモフォアであるマラカイトグリーンを結合させたMGIP_3がCALI用プローブとして有効に機能する事をモルモットの平滑筋組織を用いて確認した。さらにこの方法を細胞系へと応用した。細胞にはDT40(chicken B cell)を用いた。IP_3受容体の活性を測定後、MGIP_3を加え、レーザーを照射した。処理後にもう一度IP_3受容体活性測定し、処理前と比較したところ、レーザーを照射した細胞においてのみ有意に活性が減少していた。同視野内のレーザーのあたっていない細胞ではこうした抑制は見られなかった。続いて、ラット副腎褐色細胞腫(PC12細胞)を用いて単一細胞内局所におけるIP_3受容体不活性化を試みた。PC12細胞を神経成長因子により分化誘導後、ガラスピペットを用いてMGIP_3を細胞内に添加した。そして細胞体から細胞突起によって隔てられた成長円錐にのみレーザーを照射した後、IP_3受容体活性を調べる為に、細胞外液にブラジキンを添加した。その際の細胞体と成長円錐におけるカルシウムシグナルをFura-2によるイメージングにより解析した。その結果、レーザーを照射した成長円錐でのブラジキン応答が、レーザー非照射の場合に比べて、有意に低下することが確認された。MGIP_3非添加で同様の実験を行った場合は、レーザー照射に伴う変化は見られなかった。以上の結果から、単一細胞内局所におけるIP_3受容体不活性化が達成された。今後は、この系を用いて容量依存性Ca^<2+>流入におけるIP_3受容体の機能解明する予定である。

IP_3 - 1 is the key to the smooth structure of CALI. This method is used in cell line development. Cell DT40 (chicken B cell) After measuring the activity of IP_3 receptor, MGIP_3 was added and irradiated. After treatment, the activity of IP_3 receptor was measured. Before treatment, the activity of IP_3 receptor was measured. In the same field of vision, the cells are inhibited. The IP_3 receptor inactivation was tested in a cell by using the IP_3 receptor inactivation method. After PC12 cells were induced to differentiate with neuronal growth factor, GRANUCLEAR ® was used to add MGIP_3 into the cells. After irradiation, IP_3 receptor activity was modulated and extracellular fluid was added. The cell body and the growth cone were analyzed by Fura-2. The result is that when the radiation is applied, the temperature is lowered, and the temperature is lowered. MGIP_3 is not added, but the same thing can be done in practice. However, changes can be seen when it is illuminated. As a result, IP_3 receptor inactivation was achieved in a single cell. In the future, this system will be used to determine the capacity dependence of Ca^<2+> on the function of IP_3 receptors.

项目成果

井上尊生: "細胞内ネットワーク解析の新手法(タンパク質不活性化の時空間制御)"ファルマシア. 38. 131-134 (2002)

Takao Inoue：“细胞内网络分析的新方法（蛋白质失活的时空控制）”Pharmacia。38。131-134（2002）