新規クローニング法を用いた核受容体選択的制御因子の単離

使用新型克隆方法分离核受体选择性调节剂

• 批准号: 00J10521
• 负责人: 柿澤 供子
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J10521/
• 关键词: 核受容体; 相互作用; PPAR gamma; チアゾリディンジオン; インスリン抵抗性; ファージディスプレイライブラリー

HIT-T15細胞株より作成したT7ファージディスプレイcDNAライブラリーを用いて、GST-RXR/PPARの固定ビーズにリガンド存在下に吸着し、GST-RXR/TRその他のビーズを素通りするようなクローンをカラム操作および宿主大腸菌での増幅を繰り返すことで選択的に増幅した。最終的に標識したPPARをプローブに用いてこの増幅されたライブラリーを蛋白蛋白相互作用を用いてスクリーニングした結果、PPARγと特異的に相互作用する因子を単離した。塩基配列を決定したところ、この相互作用因子はプロテインキナーゼC結合蛋白であることが判明した。相互作用はリガンド依存性でありPPARγのリガンド結合領域と相互作用していたが、これまでわかっている転写共役因子の結合とは違って受容体のヘリックス12の変異受容体にもリガンド依存性に結合した。またこの相互作用はin vitro pull down assayおよびin vivoにおける共沈実験で明らかであるが、酵母Two-hybrid法では検出できないことが判明した。PPARγは、プロテインキナーゼCの活性を制御していると考えられている上記の因子にリガンド依存性に結合し間接的にプロテインキナーゼCの活性を制御して、PPARγおよびそのリガンドであるチアゾリヂンヂオン系薬剤がインスリン抵抗性を解除する作用の分子機構に関与している可能性が高いと考え現在実験を遂行している。

HIT-T15 cell line was prepared and used in the presence of GST-RXR/PPAR immobilized protein, and GST-RXR/TR immobilized protein was used in the presence of GST-RXR/PPAR immobilized protein. The final marker is PPARγ. The final marker is PPAR γ. The final marker is PPAR γ. The interaction factor of the protein binding protein is determined by the protein binding protein. Interaction is dependent on PPARγ, binding domain is dependent on PPAR γ. The interaction is in vitro pull down assay and in vivo. PPAR γ is a molecular mechanism that controls the activity of C in the presence of a factor that is dependent on the activity of

项目成果

Takeda T et al.: "A tamdemly repeated thyroglobulin core promoter has potential to enhance efficacy for tissue-specific gene therapy for thyroid carcinomas"Cancer Gene Ther. 9. 864-874 (2002)

Takeda T 等人：“串联重复的甲状腺球蛋白核心启动子有可能增强甲状腺癌组织特异性基因治疗的功效”Cancer Gene Ther。