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原子間力顕微鏡と組み換え蛋白を使った筋分子モーターエネルギー変換の一分子解析

使用原子力显微镜和重组蛋白对肌肉运动能量转换进行单分子分析

基本信息

批准号：
12030223
负责人：
山田武範
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ミオシンヘッドの運動にともなう微小な構造変化を検出し、同時に蛍光性ATP分子の結合・解離を観察することにより、ミオシンヘッドにおける化学反応・力学反応の関係を測定することを目標とした。そのため、現有の原子間力顕微鏡(AFM)に、まず、ナノメートル精度で駆動できるステージを組み込んだ。次に、単一蛍光分子が2波長で観察可能となるよう、レーザー、フィルター・ミラー類、微弱光検出システムを組み込んだ。以上のように改良をした装置で、微小変位計測と微弱光検出が同時にできることを確認した。次に、試料の固定方法を検討した。AFM探針と試料基板の間に、非特異的相互作用がないよう、両者ともマイナス電荷を持つよう化学処理をした。しかし、この処理をした場合でも、アプローチの際の押し込み量が大きいと、AFM探針と基板の間に結合力が生じることがわかった。このため、これを回避するためのアプローチ方法を工夫し、2000年9月の生物物理学会で報告した。こうして、まず、試料基板に遺伝子操作で特異的結合部位を導入したミオシンヘッドを使って、ミオシンヘッドをネック部分で特異的に結合させ、これに蛍光性ATPを加えて観察を行った。その結果、蛍光性ATPが基板に結合して輝点として観察できる場所にミオシンヘッドが結合していることを確認できた。次に、ステージを微小にスキャンさせそのミオシンヘッドの場所に探針をゆっくり近づけた。探針がステージとともに動き始めたところで、探針をわずかに押し込み、その後引き上げる。こうしてミオシンヘッドに微小な張力をかけ、ブラウン運動を抑えた状態で、連続測定が可能となった。この測定方法について、2001年3月の応用物理学関連連合講演会で報告する予定である。まだ実験の試行回数が少ないが、このまま試行を繰り返せばミオシンヘッドの化学・力学相関に関する情報が得られると期待できる。

The purpose of this study is to determine the relationship between chemical reaction and mechanical reaction of ATP molecules in the microstructural transformation of ATP molecules. The current atomic force microscope (AFM) is designed to measure the accuracy of atomic force microscopy. Second, a single light molecule can be detected at two wavelengths. The above improvements include: micro-position measurement; weak light detection; and confirmation. Next, the method of fixing the sample is discussed. AFM probes interact with the sample substrate in a non-specific manner and are chemically treated. The bonding force between AFM probe and substrate is generated when the substrate is processed. The biophysical society report, September 2000 The specific binding site of the sample substrate is introduced into the substrate, and the specific binding site of the sample substrate is detected by the addition of fluorescent ATP. As a result, the binding of ATP to the substrate was confirmed. The next step is to open the door and close the door. The probe is moved from the beginning to the end. The probe is moved from the end to the end. For example, if you want to change your mind, you can change your mind. This method was developed and presented at the Joint Lecture on Applied Physics in March 2001. The number of test results obtained is less than that of the test results obtained from chemical and mechanical information.