輸送シグナルとしての糖鎖マンノース6リン酸選択的付加機構の解明

阐明糖链六磷酸甘露糖作为转运信号的选择性添加机制

• 批准号: 12033219
• 负责人: 西河 淳
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Okayama University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12033219/
• 关键词: マンノース6リン酸; N-アセチルグルコサミン-1-ホスホトランスフェラーゼ; 細胞内輸送

種々の細胞において新しく生合成された酸性加水分解酵素は、N-アセチルグルコサミン-1-ホスホトランスフェラーゼ(GPT)の作用により、リソソーム輸送タグとなるマンノース6リン酸残基が付加される。そして、これがマンノース6リン酸結合タンパク質にトラップされ細胞内のリソソームに輸送される。この機構において、GPTの糖鎖に対する基質特異性は以前より生成物であるリソソームタンパク質の糖鎖構造解析の結果より推定されていた。しかし、それらはリソソームへ輸送中、或いはリソソーム内において糖鎖の修飾を既に受けている可能性があり、GPT本来の基質特異性とは異なっている可能性がある。そこで、我々は、精製したGPTと蛍光標識した各種糖鎖を用いてin vitroの系でGPTの基質特異性を検討した。我々は、まずウシ膵臓ミクロソーム分画よりイオン交換、金属キレートおよびConAクロマトグラフィーなどによりGPTを精製した。これと2-アミノピリジル化した様々な高マンノース型糖鎖を基質として反応させ、得られた生成物を逆相および順相カラムで分離し、TOF-MS、弱酸加水分解、グリコシダーゼ消化などにより生成物の構造を推定した。その結果、高マンノース型糖鎖の1-6鎖非還元末端に位置するマンノース残基に最も良くN-アセチルグルコサミン-1-リン酸が付加され、次に1-3鎖の非還元末端から一つ内側のマンノース残基に良く付加されることが判明した。また、グルコースが一残基ついた付いたGlcMan9GlcNAc2にもGPTが反応し、2カ所のN-アセチルグルコサミン-1-リン酸付加サイトの存在が判明した。

In the process of production of new enzymes in the cells of the species, acid hydrolytic enzymes, N-acetylcholine, N-acetylcholine, N In addition, it is necessary to prepare a drug delivery system for the intracellular drug delivery system. The mechanism, GPT and carbohydrate structure of the matrix specificity of the product before the analysis of the results of the complex and carbohydrate structure is estimated The possibility of modification of the carbohydrate chain in the transport system, or in the transport system, or in the matrix specificity of GPT. The GPT matrix specificity is discussed in the vitro system. I want you to know that I'm not going to let you down. The structure of the product is estimated by the reverse phase and the forward phase of the product. As a result, it was found that the most favorable N-Asorgal-1-acid residue at the position of the non-reducing end of the 1-6 lock of the high-sugar lock was added, and the second most favorable residue at the position of the non-reducing end of the 1-3 lock was added. The existence of GlcMan9GlcNAc2 GPT 2-GPT 3-GPT 2-GPT 3-GPT 3-GPT 2-GPT 3-GPT 3-GPT 4-GPT 2-GPT 3-GPT 4-GPT 3-GPT

项目成果

Atsushi Nishikawa: "The efficiency of N-linked glycosylation of bovine DNase I depends on the Asn-X-Ser/Thr sequence and the tissue of origin"Biochem.J. 354(in press). (2001)

Atsushi Nishikawa：“牛 DNase I 的 N 连接糖基化效率取决于 Asn-X-Ser/Thr 序列和来源组织”Biochem.J。

Atsushi Nishikawa: "Purification and characterization of pyruvate kinase from lamprey (Entosphenus japonicus) muscle"Comp.Biochem.Phys.B. 128(1). 157-162 (2001)

Atsushi Nishikawa：“来自七鳃鳗（Entosphenus japonicus）肌肉的丙酮酸激酶的纯化和表征”Comp.Biochem.Phys.B。