輸送シグナルとしての糖鎖マンノース6リン酸選択的付加機構の解明

阐明糖链六磷酸甘露糖作为转运信号的选择性添加机制

基本信息

  • 批准号:
    11159217
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.28万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

種々の細胞において新しく生合成された酸性加水分解酵素は、N-アセチルグルコサミンホスホトランスフェラーゼ(GPT)とホスファターゼの作用によりマンノース6リン酸残基を付加され、これらがマンノース6リン酸結合タンパク質に結合してリソソームに輸送される。この際、GPTは、リソソームタンパク質上に存在するある特定の立体構造を認識し、そのタンパク質の糖鎖に作用することが判明しているが、具体的な被認識部位の構造は未だ解明されていない。最近我々は、COS細胞を用いた分泌性の糖タンパク質DNaseIの発現実験において、ウシDNaseIの27と74位にリジン残基に置換した変異DNaseIは、リソソームタンパク質とほぼ同等のマンノース6リン酸化されることを発見した。そして、マウスとウシの各種キメラDNaseIとりGPTの認識を阻害するアミノ酸残基の存在も見いだした。また、大腸菌で発現させた部位特異的置換ウシDNaseIを本来のリソソームタンパク質であるユテロフェリンと精製GPTのin vivoにおける反応系に反応阻害剤として加える実験系を用いて、27位や74位のリジン残基以外にも幾つかの認識に重要な役割を果たすアミノ酸を見いだした。一方、このようなGPTの基質タンパク質認識機構だけでなく、本年度は糖鎖部分に対する構造特異性も検討した。ハイマンノースタイプの糖鎖をニワトリの卵より大量に精製し、糖鎖の還元末端を2-アミノピリジンで蛍光標識したものをマンノシダーゼなどで処理し、目的とする様々な構造の糖鎖を分離・調整した。精製GPTとこれらとを反応させ、生成物を逆相カラムで分離分析することにより、酵素の基質特異性を検討した。その結果、これまねGPTは反応しないと考えられていたマンノース9個にグルコースの結合したオリゴ糖にも反応し、GPTのよい基質となることが判明した。
The new compounds were synthesized by adding acid and water-decomposing enzymes, N-amino acid and hydrolyzing enzymes (GPT). The effect of acid residues was increased by the addition of acid residues, the addition of acid residues, In terms of information, GPT, and information, there are specific information about how to create knowledge, sugar, sugar and sugar. Recently, we and COS cells have been using secreted sugar, sugar, DNaseI, DNaseI, 27, 74, DNaseI, acid, etc. There are many kinds of DNaseI acid residues that are known to block the presence of sulfonic acid residues in all kinds of DNaseI. The location of the special parts of the fungus, the fungus, and the parts of the fungus, the DNaseI was supposed to be used in the first place, and the DNaseI was used in the first place. It was found that the anti-damage, anti-damage, anti- On the one hand, there is a lot of information on the part of the GPT. This year, part of the sugar industry has created a special information system. Please tell me that there is a large amount of sperm in the egg, and that there is a large amount of sugar at the end of the egg. The target is to separate the sugar from the whole body. Fine GPT, reverse phase, separation analysis, enzyme specificity, enzyme specificity, and enzyme specificity. The results of the test, the results of the GPT counter test, the results of the results and the results of the results, the results and the results of the results, the results and the results of the test, the results and the results of the results, the results and the results of the test, the results and the results of the test, the results and the results of the results, the results and the results of the test, the results and the results of the results, the results and the results of the results, the results and the results of the test, the results and the results of the test, the results and the results of the results, the results of the results, the results and the results of the results, the results of the results, the results and the results of the results, the results and the results of the results, the results, the results and the results of the test, the results and the results of the results, the results of the results, the results and the results of

项目成果

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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
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专利数量(0)
Nishikawa,A.et al.: "Identification of amino acids that modulate mannose phophorylation of mouse DNaseI,a secretory glycoprotain"J.Biol.Chem.. 274. 19309-19315 (1999)
Nishikawa,A.等人:“调节小鼠 DNaseI(一种分泌性糖蛋白)甘露糖磷酸化的氨基酸的鉴定”J.Biol.Chem.. 274. 19309-19315 (1999)
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Mo, W. et al.: "Structural Characterization of Chemically Derivatized Oligosaccharides by Nanoflow Electrospray Ionization Mass Spectrometry"Anal. Chem.. 71. 4100-4106 (1999)
Mo,W.等人:“通过纳流电喷雾电离质谱法对化学衍生寡糖进行结构表征”分析。
  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Imamura,K.et al.: "Purification and characterization of pyruvate kinase from muscle of lamprey(Entosphenus japonicus)"Conp.Biochem.Physiol.. 124A. S102 (1999)
Imamura,K.等人:“七鳃鳗(Entosphenus japonicus)肌肉中丙酮酸激酶的纯化和表征”Conp.Biochem.Physiol.. 124A。
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知道了