運動ニューロン生存活性を持つRNAの構造と機能の解析

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以前の研究により運動ニューロン生存活性を持つ新規物質を単離精製し、RNAであると結論した。当該RNAの構造を決定し、その生理活性を明らかにすることを目的とした。1)RNAによる生存活性の確認。前回までの分離精製法と異なり、ニワトリ胚骨格筋より直接RNAを抽出した。ニワトリ6日目胚の脊髄神経細胞を一次培養しバイオアッセイ系とし、抽出したRNAを加え、脊髄神経細胞に生存活性を有すことを確認した。2)cDNA libraryの作成とスクリーニング上記total RNAをDEAE sepharoseで分画したところ、5M NaCl溶出画分のRNAに強い活性が検出された。この画分よりcDNA libraryを作成し、各クローンの塩基配列を決定した。in vitro transcriptionにより作成したRNAの生存活性をバイオアッセイ系に適用し各クローンのスクリーニングを行った。一つのクローン由来のRNAが濃度依存的に活性を示した。このRNAをmns(motoneuron survival)-RNAと名付けた。3)脊髄発生分化に関与する遺伝子の単離同定運動ニューロンの自然細胞死の起こる時期に著しく変動する遺伝子を単離し、SCDGFと命名した。この遺伝子はラット胎児で運動ニューロンの発生分化に重要な役割を担うnotochordおよびfloor plateで強く発現し、in vitroで増殖活性を持つことを示した。さらに、SCDGFに相同な遺伝子を検索し、新たな遺伝子を単離し、SCDGF-Bと名付けた。SCDGF-Bはin vitroで増殖活性を持つが、SCDGFと異なり成ラットの脊髄のうち運動ニューロンでのみ発現していることが明らかとなった。