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膵液中hTERTを指標とした膵癌診断法の開発

以胰液中hTERT为指标的胰腺癌诊断方法的开发

基本信息

批准号：
12217053
负责人：
渡邊弘之
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217053/
关键词：
hTERTmRNA K-ras変異 p53変異膵癌膵液

项目摘要

難治癌である膵癌の早期診断と鑑別診断の向上をめざして、膵液中hTERTmRNAの検出が膵癌診断法としていかなる意義を有するかについて検討した。各種膵疾患患者より、十二指腸内視鏡下経乳頭的に純粋膵液をセクレチン刺激下に分画採取し、-80℃にて凍結保存した。一方、膵癌細胞株、膵癌組織、膵液より、Total RNAを抽出した。次いでRT-PCRを行い、電気泳動後、hTERTmRNAの発現を判定した。コントロールとして、G3PDHプライマーを用いた。膵癌細胞株(PaCa-2、PANC-1)や膵癌組織では、すべてhTERTmRNAが陽性であった。一方、凍結保存膵液の検討では、膵癌18例中6例(33%)にhTERTの特異バンドが検出されたが、粘液産生膵腫瘍7例と慢性膵炎24例には、検出されなかった。膵癌症例の臨床病理学的因子についてみると、腫瘍径別では、腫瘍径2cm以下のTS_1症例では、hTERTmRNAの陽性率は67%(2/3)と高率であったが、腫瘍径2cm以上のTS_2,TS_3,TS_4では、それぞれ0%,43%,50%であった。また、膵癌の占拠部位別では、頭部で38%(3/8)、体部で38%(3/8)、尾部で0%(0/2)であった。さらに、臨床病期別では、stageIで100%(1/1)、stageIIで0%(0/2)、stageIIIで33%(1/3)、stageIVで30%(3/10)であった。一方、同一症例でのK-ras変異の陽性率は、HPA法で71%(12/17)、MASA法で82%(14/17)であり、p53変異はPCR-SSCP・direct sequencing法で44%(7/16)であった。また、K-rasとp53が共に変異陰性を示した3症例中1例にhTERTmRNAの発現がみられた。以上のように、膵液中のhTERTmRNAは、癌特異性の高い新しい膵癌遺伝子診断マーカーとして期待されるが、さらに検出感度を高める工夫が求められる。今後、膵液スメアを用いてhTERTを指標としたin situhybridizationやhTERTに特異的なモノクローナル抗体による免疫染色の検討も試みたい。

Early diagnosis and differential diagnosis of refractory cancer, detection of hTERT mRNA in serum, and significance of cancer diagnosis All kinds of patients with various diseases, duodenal endoscopy under the nipple of the pure liquid under the stimulation of the sample,-80℃ frozen storage A recipe, a tumor cell line, a tumor tissue, a serum, a Total RNA extract. In the second step, RT-PCR was performed, and hTERTmRNA expression was determined after electroporation. G3PDH The expression of hTERT mRNA was positive in both PaCa-2 and PANC-1 cell lines and cancer tissues. Among the 18 cases of cancer, 6 (33%) cases were found to be specific to hTERT, 7 cases were found to be mucinous, and 24 cases were found to be chronic inflammation. The positive rate of hTERTmRNA was 67%(2/3) in TS1 cases with tumor diameter less than 2 cm, and the positive rate was 0%(2/3) in TS2, TS3, TS4 cases with tumor diameter more than 2 cm. The percentage of cancer in the head, body and tail was 3/8%(3/8), 3/8%(3/8) and 0%, respectively. Clinical stage, stage I 100%(1/1), stage II 0%(0/2), stage III 33%(1/3), stage IV 30%(3/10). The positive rate of K-ras variant was 71%(12/17) by HPA method, 82%(14/17) by MASA method and 44%(7/16) by PCR-SSCP·direct sequencing method. The expression of hTERT mRNA was detected in 1 of the 3 cases. hTERT mRNA in the above mentioned tissues is highly novel and cancer-specific for diagnosis of cancer. In the future, the use of hTERT as an indicator of the presence of hTERT in the serum will result in the detection of hTERT specific antibodies.