HLA-A2とA24テトラマーを用いたC型肝炎ウィルス特異的CTL活性の測定

使用 HLA-A2 和 A24 四聚体测量丙型肝炎病毒特异性 CTL 活性

• 批准号: 12877084
• 负责人: 小林 光樹
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877084/
• 关键词: HCV; CTL; テトラマー; C型肝炎ウィルス; HLA-A2; インターフェロン治療; フローサイトメトリー; 細胞障害性T細胞

HLA-A*0201拘束性CTLについては、HCVに対するCTLエピトープが公表されており、このエピトープを用いてテトラマーを作成しCTL活性の検討を行った。末梢血単核球を既報のHCVエピトープ(コア領域a.a.132-140 : DLMGYIPLV : HCV-1株アミノ酸配列に基づく)とIL-2で刺激することによってCTL細胞を作成した。この細胞は、E : T比10 : 1で^<51>Cr放出試験を行った時に34.1%の細胞障害活性を示し、フローサイトメトリーでのテトラマー陽性細胞は16%であった。そこでインターフェロン治療著効のC型慢性肝炎5例(HLA-A*0201陽性5例)の末梢血単核球について検討した。この結果、インターフェロンによるHCV消失後12〜45ヶ月後の末梢血において、HCVコア抗体価の低下にもかかわらず、HCV特異的なCTLは残存することが確認された。次にHLA-A*2402については、HCV特異的なCTLの報告が無く、CTLエピトープの決定を初めに検討をすることにした。このためにHCV由来9-ペプチドLYGNEGLGW(core85-93)、GFADLMGYI(core129-137)、CYSIEPLDL(NS5A)を用いて、HLA-A*2402とβ2-microglobulinとの複合体を作成し、マイクロタイタープレートに固相化した後にCD8陽性細胞と反応させInterferon-γの産生を検討することによって、CTL活性を検討した。この結果、インターフェロン治療著効の9症例のうち5症例で、これらのペプチド・HLA複合体に対する反応が確認されたのに対して、無効例10例では反応が見られなかった。また、反応した症例では複数のペプチドに対して反応が見られ、これらのペプチドがCTLエピトープである可能性が示唆された。現在、これらのペプチドを用いてCTL細胞を作成中である。

HLA-A*0201 binding CTL activity is discussed in detail below. The peripheral blood mononuclear cells were reported to be HCV positive (domain a.a.132-140 : DLMGYIPLV : HCV-1) and IL-2 positive (domain a.a.132- 140: DLMGYIPLV: HCV-1). The ratio of E : T was 10 : 1. <51>When Cr was released, 34.1% of the cells showed inhibition activity, and 16% of the cells showed inhibition activity. 5 cases of chronic hepatitis C (HLA-A*0201 positive 5 cases) were treated with the treatment of peripheral blood mononuclear cells. The results showed that 12 ~ 45 months after HCV disappeared, the peripheral blood was still in the middle, the HCV antibody level decreased, and HCV-specific CTL remained. HLA-A*2402 is the first to be detected, and HCV-specific CTL reports are not available. The HCV origin 9-protein LYGNEGLGW(core85-93), GFADLMGYI(core129-137), CYSIEPLDL(NS5A), HLA-A*2402 and β2-microglobulin complex were used to prepare CD8-positive cells, reverse transcription of Interferon-γ and CTL activity. The results showed that 9 cases were treated with anti-HLA complex, 5 cases were treated with anti-HLA complex, and 10 cases were treated with anti-HLA complex. For example, the possibility of multiple responses to CTLs is demonstrated. Now, we're going to use CTL cells.

项目成果

小林光樹, 椎名正明, 上野義之, 石井元康, 滝沢壽男, 菊本, 下瀬川徹: "VIRUS SPECIFIC CTL ACTIVITY AFTER INTERFERON MONOTHERAPY TO CHRONIC HEPATITIS C"Hepatology. 34巻. (2001)

Mitsuki Kobayashi、Masaaki Shiina、Yoshiyuki Ueno、Motoyasu Ishii、Hisao Takizawa、Kikumoto、Toru Shimosekawa：“干扰素单药治疗慢性丙型肝炎后病毒特异性 CTL 活性”，肝病学第 34 卷。