C型肝炎ウィルス特異的ヘルパーTクローン樹立と抗原依存性TH1・TH2分化の検討

丙型肝炎病毒特异性辅助T克隆的建立及抗原依赖性TH1/TH2分化的检测

• 批准号: 08877087
• 负责人: 小林 光樹
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877087/
• 关键词: C型肝炎ウィルス; Tリンパ球; リコンビナント・ワクシニア・ウィルス

C型肝炎ウィルス(HCV)抗原特異的ヘルパーT細胞クローンの樹立と並行して、HCVコア抗原に対するT細胞反応とウィルス排除の関連を検討した。抗原には、HCVコア抗原として、JCC-2(コア領域のaal〜aal20)蛋白(20、2、0.2μg/ml)と、コア領域全長をカバーする合成ペプタイド(アミノ酸20残基長のP1〜P10の計10個、各10μg/ml)を用いた。C型慢性肝炎のインターフェロン治療2症例の末梢血単核球を分離して、^3H-サイミディンの取込を検討したところ、JCC-2に特異的な反応はインターフェロン治療前で2例中0例に対し、治療1日目に2例中2例に20μg/mlの濃度で取り込みの増加が見られた。また、合成ペプタイドに対し、1例では治療前には全ペプタイドに無反応であったが、治療1日目にp4・p7・p10に反応していた。2例目では治療前にはp4・p5・p6・p7・p8・p10のペプタイドに反応が見られ、治療1日目にはp4・p5・p6・p7・p8・p10に加え、p1・p2・p9にも反応が拡大していた。肝内浸潤リンパ球からHCVコア抗原特異的クローンを樹立するため、肝生検組織を細切し、抗CD3抗体とIL-2刺激下に2週間培養した。次に、ファイコール比重遠心分離を行うことによって、肝内浸潤リンパ球を分離・培養することができた。この肝組織由来リンパ球(LIL)を、自己末梢血由来単核球(γ線、4000rad照射後)に上記JCC-2(20μg/ml)と合成ペプタイド(P1〜P10、各10μg/ml)を抗原に用い、^3H-サイミディンの取込によって一次スクリーニング試験を行った。肝組織由来T細胞の反応は、1例のLILではp4とp10に、他の一例のLILではJCC-2とp4に強い取り込み反応が見られた。

To investigate the relationship between the establishment and elimination of HCV antigen-specific T cell responses. Antigens are used in the synthesis of JCC-2 protein (20, 2, 0.2μg/ml) and HCV RNA antigen (10 residues P1-P10 of HCV RNA 20 residue length, 10μg/ml each). The concentration of 20μg/ml in 2 patients with chronic hepatitis C before treatment increased significantly. 1 case before treatment. 2 cases after treatment. 3 cases after treatment. 4 cases after treatment. 2 cases before treatment, p4·p5·p6·p7·p8·p10, p4·p5·p6·p7·p8·p10, p1·p2·p9 Liver tissue was dissected and incubated with anti-CD3 antibody and IL-2 for 2 weeks. The secondary, secondary, and secondary phases of liver infiltration were isolated and cultured. The liver tissue derived lymphocyte (LIL) and peripheral blood derived lymphocyte (gamma ray, 4000rad irradiation) were identified as JCC-2(20μg/ml) and synthetic peptides (P1 ~ P10, 10μg/ml each). Liver tissue derived from T cells, 1 case of LIL, JCC-2, p10, p10, p10,

项目成果

伊妻壮晃、小林光樹、他: "C型慢性肝炎IFN治療終了後のコア抗原特異的末梢血単核球反応の検討" 肝臓. 38・S(1). 96 (1997)

Souaki Izuma、Mitsuki Kobayashi 等：“慢性丙型肝炎 IFN 治疗完成后核心抗原特异性外周血单核细胞反应的检查”肝脏 38·S(1) 96。

Kobayashi, K.et al.: "Cytokine profiles produced by CD4-positive T lymphocytes stimulated by anti-CD3 antibody in patients with chronic hepatitis C" Journal of gastroenterology. 33・4(in press). (1998)

Kobayashi, K. 等人：“慢性丙型肝炎患者抗 CD3 抗体刺激的 CD4 阳性 T 淋巴细胞产生的细胞因子谱”，胃肠病学杂志 33・4（出版中）。

伊妻壮晃、小林光樹、他: "IFNβ治療時におけるコア抗原刺激下C型慢性肝炎末梢血単核球サイトカイン産生の経時的変動" 肝臓. 38・S(2). 147 (1997)

Souaki Izuma、Mitsuki Kobayashi 等人：“IFNβ 治疗期间核心抗原刺激下慢性丙型肝炎外周血单核细胞细胞因子产生的时间变化”肝脏 38·S(2)。

伊妻壮晃、小林光樹ほか: "C型慢性肝炎IFN治療後のコア抗原特異的末梢血単核球反応の検討" 肝臓. 38巻臨時増刊号(未定). (1997)

Souaki Izuma、Mitsuki Kobayashi 等：“慢性丙型肝炎 IFN 治疗后核心抗原特异性外周血单核细胞反应的检查”肝脏第 38 卷特刊（待定）。