変異誘導及び代謝工学による海産真正眼点藻ナンノクロロプシスの遺伝的改良に関する研究

海洋真滴眼藻微拟球藻诱变与代谢工程遗传改良研究

• 批准号: 01F00122
• 负责人: 藤田 雄二
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01F00122/
• 关键词: 海産真正眼点藻; ナンノクロロプシス; 変異誘導; 高度不飽和脂肪酸; 餌料植物プランクトン

Nannochloropsis sp.(ナンノ株)のWT株(野生株)とそれから誘導した7変異株を供試した。これらの株を海水補強培養液を用いて、光強度60μE^<-2>S^<-1> PFD(12:12LD)条件下で成育に対する温度の影響を調べた。変異株のうち4株は、WT株と同様に18℃で最も良く成育し、ST-6株より成育率は高かった。変異3株は、25℃か28℃で最も高い成育率を示した。35℃ではいずれの株も成育しなかった。これらの株を大量培養し、得られたの藻体の脂質について試験した。藻体から抽出した全脂質量は、WT株と比較して、約80〜120%の範囲で変動した。その脂肪酸組成を分析した結果、WT株と比較して、4株において高度不飽和脂肪酸(C 20:4 アラキドン酸、C 20:5 イコサペンタエン酸、C 22:6 ドコサヘキサエン酸)の含有率が高く、これら3種類の脂肪酸の合計でST-6株より25〜60%増加した。WT株と変異株の代表株について、脂肪酸合成の一つの鍵酵素となるアセチルCoAカルボキシラーゼ(ACCase)活性を測定した。しかし、この酵素の活性と全脂質量や脂肪酸組成とが必ずしも相関しなかった。WT株のACCase活性は除草剤によってやや抑制されることから、このACCaseは真核型と原核型の二つの型が含まれると判断された一方、変異株のACCase活性は除草剤によって殆ど抑制されなかった。WT株と3変異株から抽出したタンパクをSDS-PAGE電気泳動して、西洋ワサビのパーオキシダーゼを結合したstreptavidinをプローブとする免疫プロット法でACCaseを検出した結果、34〜210KDaの範囲にビオチン-ポリペプチドの7本のバンドが検出された。51KDaのポリペプチドのN末端アミノ酸(10種)配列から、シロイヌナズナなどのACCaseと約80%の相同性が認められた。

Nannochloropsis sp. (wild strain) WT strain (wild strain) was used in the test. Under the condition of 60 μ E ^ & lt;-2> S ^ & lt;-1> PFD (12:12LD), the growth temperature has a negative effect on the temperature. The growth rate of 4 strains, WT strain and ST-6 strain were the best at 18 ℃ and 18 ℃ respectively. The highest growth rate was found in 3 plants at 25 ℃ and 28 ℃ at 25 ℃. The plants grow up and grow at 35 ℃. The plants were cultured in large quantities, and the algae were cultured in large quantities. The phytoplankton extract the total fat content, the WT strain ratio, and the range of about 80,120%. The results of fatty acid composition analysis, the comparison of WT strains, 4 strains of fatty acids and fatty acids (C 20:4, C 20:5, C 22:6). The percentage of fatty acids was very high, and the percentage of fatty acids was 25% higher than that of ST-6. The WT strain represents the strain of fatty acid synthesis, and the activity of fatty acid synthesis is determined by the determination of fatty acid synthesis, enzyme activity, CoA enzyme activity and ACCase activity. The activity of enzyme and the composition of whole fat fatty acid must be different from each other. The ACCase activity of WT plant was inhibited by herbicidal herbicides, ACCase eukaryotypes, prokaryotypes, prokaryotes, prokaryotes, herbicides, herbicides. The 3-year-old strain of WT was extracted and tested by SDS-PAGE electrophoresis, Western medicine and ACCase. The results of ACCase and 34~210KDa were detected by Elisa, Elisa, Elisa and Elisa, respectively. In 51KDa, there are 10 kinds of N-terminal phosphonic acid (10 kinds). There are about 80% of the same products in the same class of ACCase.